NY_T 2640-2014植物源性食品中花青素的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.01B 05NY中华人民共和国农业行业标准NY/T2640—2014植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法Determination of anthocyanidins in plant origin products-High performance liquid chromatography2014-10-17 发布2015-01-01实施中华人民共和国农业部3发布 NY/T 2640—2014前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：四川省农业科学院分析测试中心、农业部食品质量监督检验测试中心（成都）、浙江省农业科学院农产品质量标准研究所，本标准主要起草人：胡莉、雷绍荣、郭灵安、毛建霏、仲伶俐、杨晓凤、侯雪、郑蔚然一 NY/T2640—2014植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了植物源性食品中的飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素共6种花青素的高效液相色谱测定方法，本标准适用于植物源性食品中花青素含量的测定本标准的检出限：以称样量为1g.定容体积为50ml.计，飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素5种花青素的检出限均为0.15mg/kg；矮牵牛色素的检出限为0.5mg/kg。同样条件下定量限：飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素5种花青素均为0.5mg/kg；矮牵牛色素为1.5mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件.其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理植物源性食品中的花青素主要以花色苷的形式存在。试样经乙醇一水的强酸溶液超声提取花色苷后，经沸水浴将花色苷水解成花青素.用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T6682规定的一级水。4.1无水乙醇(CH()H)：色谱纯。4.2甲酸（CH（)）：色谱纯4.3甲醇(CH:()H)：色谱纯。4.4盐酸(HCI)：优级纯4.5提取液：无水乙醇十水+盐酸=2+1+1（V+V+V）.取200ml无水乙醇、100ml.水和100ml盐酸混匀。4.610%盐酸甲醇溶液（体积比）：取10ml盐酸、90ml.甲醇混匀。4.7飞燕草色素（Delphinidin）：CAS号528-53-0.纯度≥96%。4.8矢车菊色素（Cyanidin）：CAS号528-58-5.纯度≥98%。4.9矮牵牛色素（Petunidinchloride）：CAS号1429-30-7.纯度≥96%。4.10天竺葵色素（Pelargonidin）：CAS号134-04-3.纯度≥96%。4.11芍药素(Peonidin）：CAS号134-01-0.纯度≥98%。4. 122锦葵色素（Malvidin）：CAS号643-84-5.纯度≥96%。4. 133单标储备溶液1 NY/T2640—2014分别准确称取飞燕草色素（Delphinidin）、矢车菊色素（Cyanidin）、矮牵牛色素（Petunidinchloride）、天竺葵色素（Pelargonidin）、芍药素（Peonidin）和锦葵色素（Malvidin）共6种花青素标准品5.0mg，用10%盐酸甲醇溶液（4.6）溶解并分别定容至10ml.容量瓶中，即为500mg/1.的单标储备液，于一18℃下.贮存于密闭的棕色玻璃瓶中.保存有效期为6个月。4.14混合标准使用液在使用中将单一标准储备液进行混合后，用10%盐酸甲醇溶液（4.6）作为溶剂.并逐级稀释成0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/I、25.0mg/L、50.0mg/L.或其他浓度的花青素混合标准使用液。在4℃条件下.有效期为6个月。4.155滤膜：0.45um，水相滤膜5仪器与设备5.1高效液相色谱仪带紫外或二极管阵列检测器。5.2天平：精度0.01mg,0.01g。5.3水浴锅：精度土2℃。5.4匀浆机。5.5超声波清洗机。5.6粉碎机。6分析步骤6.1试样制备采用四分法分取样品，含水率高的样品，如葡萄、茄子等，取约200g于匀浆机中匀浆；含水率低的样品，如黑米、黑豆等，用粉碎机进行粉碎，过250μm的筛。所有样品在一18℃条件下保存。6.2提取根据样品中花青素含量，称取样品1.00g～1