NY_T 2724-2015甘蔗脱毒种苗生产技术规程.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2724—2015甘蔗脱毒种苗生产技术规程Technique regulation for virus-free plantlet production of sugarcane2015-05-21发布2015-08-01实施营业中华人民共和国农业部发布 NY/T 2724—2015前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：浙江省农业科学院。本标准主要起草人：陈剑平、陈志、汪一婷、牟豪杰、吕永平。I NY/T2724—2015甘蔗脱毒种苗生产技术规程1范围本标准规定了甘蔗脱毒种苗的术语和定义、脱毒种苗生产、甘蔗种苗病毒检测种类及方法、种苗包装、运输等要求。本标准适用于甘蔗脱毒种苗生2规范性引用文件PUBLBLISAE应用口可少的下列文件对于本件的风件，仅注日期的版本适用于本文ST月文件，体最单文件件。凡是不注日期的勺弓有的O蒸种蕾1NY/T179花卉朴苗NY/T23喜技术规程RESEARCHVIS3术语和定定义适下列术于本文语3. 1店甘蔗脱毒virus-free plantlearcane经检测确蔗种苗3. 2组培瓶苗in-ag生长在培琼脂中的3. 3C无琼脂苗x-agarat联出关日进从培养容器U3. 4ntler穴盘苗plug穴盘中移栽成活的大蔗组培苗4脱毒种苗生产流程4.1无菌材料的获得4.1.1外植体材料的选择选择具有待生产品种典型性状、无明显病虫害、品种纯正的健壮植株，切取顶芽及饱满带节间腋芽。4.1.2外植体处理、消毒及接种外植体处理顶芽及带节间腋芽切成约1cmX1cm×1cm大小的块状，剥去外面2层～3层包被鳞（叶）片。清洗预处理好的外植体，用洗洁精溶液浸泡并振荡10min～20min，然后在自来水下流水冲洗15min~20 min。4. 1.2. 3乙醇溶液处理1 NY/T2724—2015在准备好的超净台上，将清洗后的外植体转移到无菌锥形瓶中，倒人70%～75%乙醇溶液没过外植体表面1cm，轻摇锥形瓶以除去植物材料表面气泡，30s～60s后将酒精倒去，用无菌水冲洗外植体3次。次氯酸钠处理用有效氯浓度0.5%～1.0%的次氯酸钠溶液浸泡经乙醇溶液处理的植物材料，浸泡过程中不断轻摇锥形瓶以除去外植体表面气泡，10min～15min后，倒出次氯酸钠溶液，植物材料用无菌水清洗3次～5次后备用。氯化汞处理经70%～75%乙醇溶液处理的植物材料也可用0.1%氯化汞溶液代替次氯酸钠溶液进行表面消毒，浸泡时间为8min～10min，后续清洗同次氯酸钠处理。外植体接种在超净工作台上取出灭过菌的接种盘，在接种盘内放置1张～2张无菌滤纸，用冷却、无菌的接种器械将经过表面消毒的植物材料取出（每次取3个～5个），放在无菌滤纸上吸干材料表面水分，然后将外植体接人外植体萌发培养基（参见附录A），1瓶接种1个外植体，封口。4.1.3外植体培养接种完成后统一贴上标签，注明品种、接种日期、接种培养基等信息，放在组培用托盘内，送人培养室进行培养，培养温度控制在（25士3）℃，光照强度25μmol·m-2·s-1～40μumol·m-2·s-1，光照时间每天不低于12h，培养期间及时去除被污染材料。4.2不定芽诱导和增殖4.2.1不定芽诱导由4.1得到的高约1.5cm～2.5cm的无菌、成活芽萌发材料，在无菌工作台上从芽基部与母体分离，然后接种在不定芽诱导培养基中，培养环境同4.1.3。4.2.2不定芽增殖由4.2.1获得增殖良好的簇生甘蔗培养材料，在无菌工作台上以3个～4个不定芽为接种单位从基部进行分离（芽高度控制在2.0cm～3.0cm），然后接种在不定芽增殖培养基中，培养环境同4.1.3。每25d～30d继代1次。4.3茎尖培养4.3.1材料选择选择经由4.2.2连续培养获得的健壮、无菌不定芽。4.3.2茎尖剥离在无菌条件下，将簇生不定芽从基部单个分离，并自芽基部以上0.5cm左右处切断，选取芽基部分进行茎尖剥离。在体视镜下用无菌解剖刀小心逐层剥离外层叶鞘，直至露出长约0.3mm～0.5mm的茎尖，然后更换为无菌且未使用过的解剖刀将茎尖从母体材料切下，立即接种于茎尖伸长培养基中。4.3.3茎尖伸长培养将4.3.2接种好的甘蔗茎尖置于（23士3)℃，光照强度10umol·m-2·s-1～20umol·m-2s-1，光照时间每天不低于12h。4.3.4不定芽诱导茎尖伸长生长至1.5cm～2.0cm后即可接种到不定芽诱导培养基中，培养环境同4.1.3。对每一个成活茎尖材料进行编号。4.3.5再生材料增殖将4.3.4获得的不定芽接种到不定芽增殖培养基中，培养环境同4.1.3。每25d～30d继代1次。4.4茎尖培养