SNT 1900-2007玉米晚枯病菌检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1900--2007玉米晚枯病菌检疫鉴定方法Identification of Cephalosporium maydis Samra, Sabet et Hingorani2007-05-23 发布2007-12-01实施中华人民共和国发布囍茶除层技0国家质量监督检验检疫总局“数码防伪 1中华人民共和国出人境检验检疫行业标准玉米晚枯病菌检疫鉴定方法SN/T 1900—2007*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 -电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*字数 ７千字开本 880×1230 1/16印张 0.52007年9月第一次印刷2007年9月第一版印数 1—2 000定价6.00元书号：155066·2-18044 SN/T 1900—2007前言本标准的附录 A和附录B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准起草人：严进、吴品珊、刘伟。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1900--2007玉米晚枯病菌检疫鉴定方法1范围本标准确立了进境玉米（Zea mays L.）种子及其夹带物上的玉蜀黍头孢霉（Cephalosporium maydis Samra,Sabet et Hingorani)的检疫和鉴定方法。本标准适用于对来自玉米晚枯病发生国家和地区的所有用于加工和繁殖的玉米的进境检疫。12原理2.1分类地位英文名:Late Wilt of Maize学名 :Cephalosporium maydis Samra, Sabet et Hingorani玉米晚枯病菌（Cephalosporium maydis Samra,Sabet et Hingorani)属真菌界（Fungi），有丝分裂孢子真菌（Mitosporic fungi）。2.2鉴定原理此真菌可通过种子传播，种传率为11%，另外，此真菌还可以菌核的形态存活于病残体中。此真菌为兼性寄生菌。因此，可以从种子和植物残体上分离病原菌并进行形态鉴定。3仪器和用具3.1仪器体视显微镜、普通光学显微镜（具油镜和测微尺）、普通天平（感量0.1g）、洁净工作台、光照培养箱或光照培养架、近紫外光灯管（根据培养箱或培养架尺寸）、高压灭菌器。3.2　用具手持放大镜、滤纸、培养皿、烧杯、三角瓶、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、量筒、吸管、酒精灯。4　试剂和培养基4.1试剂马铃薯、葡萄糖、琼脂粉、无菌水、1.25%次氯酸钠、75%酒精。4.2培养基马铃薯葡萄糖培养基(PDA）。5鉴定方法5. 1 症状检查受侵染的种子表面无症状。受侵染的茎杆变干、凹陷、中空，维管束变为红褐色。5.2保湿培养5.2.1种子保湿培养采用冷冻滤纸法检测。每份样品取400粒种子，用1.25%的次氯酸钠（NaOC1)溶液表面灭菌3 min～4 min 后,放在垫三层灭菌湿滤纸的培养皿中,每皿10粒,在室温20℃～22℃下放置 24 h后,在-20℃下冷冻24h，然后转至25℃培养箱或培养架上培养7d，近紫外光照和黑暗各12h交替。5.2.2植物残体保湿培养植物残体在75%的酒精溶液中浸泡1min，经灭菌水洗涤后放置在垫三层湿润滤纸的培养皿中，在 SN/T 1900--200725℃培养箱或培养架上培养7d，近紫外光照和黑暗各12h交替。5.3　分离7d后观察种子表面或植物残体表面是否有白色真菌生长，如有，则用体视显微镜观察是否产生分生孢子,分生孢子是否聚成头状。如观察到分生孢子聚成头状，则准备一片灭菌的凹玻片，凹槽内滴数滴无菌水，在体视显微镜下用细针挑取孢子于凹玻片上的无菌水中，配成孢子悬浮液，用接种环在PDA培养基上划线做单孢分离。5.4生物学鉴定将划线后的PDA培养基在室温条件下放置24h，在体视显微镜下用细针挑取单菌落转至放置在灭菌载玻片上的PDA培养基块0.5cm×0.5cm上，加盖玻片。载玻片放置在垫三层湿润滤纸的培养Ⅲ中保湿，25℃培养箱或培养架上培养5d，近紫外光照和黑暗各12h交替。在显微镜下观察分生孢子梗和分生孢子的着生方式和形态特征。6鉴定特征在PDA上，菌落呈淡灰色，后变黑色。分生孢子梗从菌丝生出，直立，顶端生分生孢子，分生孢子梗长 30 μm～250 μm。分生孢子聚成头状;透明,单细胞,椭圆形,大小（3.6 μm～14 μm）×（3 um~3.6 μm)。本种与危害玉米的另一个头孢菌Cephalosporiumacremonium（玉米黑束病菌）的区别是后者的分生孢子梗较短,23μm～78 μm，分生孢子较小，（2.9um8.7 um)X(1.5 μm~2.9 μ