SNT 2215-2008进出口动物源性食品中吩噻嗪类药物残留量的检测方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2215—2008进出口动物源性食品中盼噻嗪类酶联免疫法药物残留量的检测方法Determination of phenothiazines residuesin animal original food for import and export--Enzyme-linked immunosorbent assay2009-06-01实施2008-11-18 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局层电真价数码防伪 SN/T 2215--2008言前本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张晓峰、施伟良、汪云泉、朱振江、方莹。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2215-—2008进出口动物源性食品中盼噻嗪类药物残留量的检测方法酶联免疫法 范围1本标准规定了动物源性产品中盼噻嗪类抗生素残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于肉类、内脏、水产品和牛奶中氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、丙嗪和三氟丙嗪残留总量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696:1987，MOD)3样品的制备和保存3.1样品制备组织样品：从全部样品中取有代表性样品约500g，用组织捣碎机统分捣碎均匀，均分成两份，分别装入容器中，密封,并标明标记。牛奶和奶粉：从原始包装中取有代表性样品药500g，充分混匀，均分成两份，分别装人容器中，密封，并标明标记。3.2样品保存将样品于—18℃～一20℃条件下保存4　方法提要本标准以碱性乙腈提取样品冲残留的氯丙榛、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪丙嗪和三氟丙嗪。微孔板中包被有氯丙嗪抗体，加人氯丙嗪标准品或样品提取液和酶标物后,游离氯丙嗪或提取液中残留物和酶标记氯丙嗪竞争性的与抗体结合。通过洗涤除丢未结合的氯丙嗪和酶标记物，然后加人底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出样品中残留物的含量，5试剂和材料除注明外，所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。5.1吩噻嗪检测试剂盒(参见附录 A)。5.2 乙腈。5.340%氢氧化钠溶液：准确称取40.0g氢氧化钠，用水溶解并定容到100mL。5.4标准品：氯丙嗪,纯度≥98%;乙酰丙嗪,纯度≥98%;丙酰丙嗪,纯度≥98%;丙嗪,纯度≥98%；三氟丙嗪,纯度≥98%。5.5标准品溶液5.5.1 标准品储备液:分别称取 5 mg(精确到0.1 mg)的氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、丙嗪、三氟丙嗪，用甲醇溶解并定容至10 mL,得到质量浓度为500mg/L的标准储备溶液。该储备液可以在一20℃避光条件下保存12个月。5.5.2混合标准品中间液：分别吸取各种标准品储备液0.2mL(丙嗪为0.1mL)于棕色定容量瓶，用1 SN/T 2215--2008甲醇定容至10mL，各种酚噻嗪类药物浓度为10mg/mL，可在一20℃避光条件下保存3个月。5.5.3混合标准品工作液：根据需要以试剂盒中样品稀释缓冲液配制。6仪器6.1酶标仪：具 450 nm波长。6.28 道移液器:10 μL～100 μL。6.3 单道移液器:10 μL～100 μL,20 μL～200 μL,100 μL～1 000 μL 和 2 mL～10 mL。6.4　高速低温离心机:8000 r/min。6.5电子天平：感量0.1 mg。6.6氮吹仪。6.7组织捣碎机。6.8漩涡混合器。7 分析步骤7.1　提取称取5.0g样品（精确到0.1g），置于50mL具盖聚丙烯酰离心管中，加人20mL乙腈（5.2)和0.5 mL 40%氢氧化钠溶液（5.3），漩涡混合2min，超声提取10 min。6 000 r/min离心5 min，吸取2 mL上清液于干净试管，氮气吹至将干（注意不能吹干），用样品稀释缓冲液（试剂盒提供)定容到1.0 mL，即可供 ELISA检测用。最后稀释倍数为 2。7.2测定条件1)7.2.1酶标仪测定条件酶标仪测定波长为450nm。7.2.2洗板条件人工洗涤次数5次，每次加入洗涤液量为250μL。自动洗板可以预定5次周期。7.2.3操作条件所有操作应在室温下（20℃～25℃)进行，试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温（20℃25℃）后方可使用。7. 3测定步骤7.3.1将测定需用的微孔板备齐并插人微孔架上，记录标准溶液及