SN_T 3632-2013出口果蔬汁中环状脂肪酸芽孢杆菌检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3632-2013出口果蔬汁中环状脂肪酸芽孢杆菌检测方法Method on the detection of Alicyclobacillus spp. in fruit andvegetable juices for Export2013-08-30 发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局K站w4000982、割涂层查真伪 SN/T 3632—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民共和国陕西出入境检验检疫局、吉林省产品质量监督检验院、北京奥博星生物技术有限责任公司负责起草，本标准主要起草人：赵贵明、史艳宇、张琦、王小玉、赵勇胜、郦炜、杨海荣、王娉、胡玥、冯家望、华蕾、葛秋惠。1 SN/T 3632--2013出口果蔬汁中环状脂肪酸芽孢杆菌检测方法1范围本标准规定了果蔬汁中环状脂肪酸芽孢杆菌（Alicyclobacillus spp.）的检验方法。本部分适用于果蔬汁中环状脂肪酸芽孢杆菌的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测　实验室技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1脂环酸芽孢杆菌 Alicyclobacillus spp.脂环酸芽孢杆菌是一群耐热、嗜酸的杆状芽孢菌，革兰氏染色为阳性至可变，其在 pH 范围2.0～6.0，温度为45℃时生长良好。4设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。4.1天平:感量0.1g。4.2冰箱:2℃～5℃。4.31恒温培养箱：45℃±1℃,65℃±1℃。4. 4恒温水浴箱:80℃士1℃，45℃±1℃。4.5相差显微镜：10×～100×。4.6无菌锥形瓶:500mL,250mL。4.7无菌平Ⅲ：直径90 mm。4.8无菌吸管：1 mL（具0.0l mL刻度）,10.0 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及吸头。4.9pH计或pH比色管或精密pH试纸。4.10滤膜:直径0.45 μm。4.11涡旋混合器。5培养基和试剂5.1 K琼脂:见附录 A。 SN/T 3632—20135.2　YSG琼脂及 YSG肉汤:见附录 A。5.3BAT琼脂及 BAT肉汤:见附录 A。5.4 香草酸:100 mg/kg。第一法环状脂肪酸芽孢杆菌检验(常规方法)6检验程序检验程序见图1。检样（浓缩果汁及果蔬汁生品）10g无菌蒸馏水或BAT或YSG肉汤1:10稀释，混匀80℃±1℃，加热10mm后冷却至40℃~45℃能过滤样品（选择性）不能过滤样品45°±1℃,2d~5 d直接涂平板（选择性）(增爾)过滤，转移2张滤膜分别置K在K琼脂与YSG或BTA在K琼脂与YSG或BTA琼脂与YSG（或BAT琼脂）琼脂上划线琼脂上涂布平板45℃±1℃2d~5d45°c±1℃2d～5d45℃±1℃2d~5d挑可疑菌落，接种于1个K琼脂平板、1个中程培养基苹板和2个YSG琼脂平板个YSG平板65%其余平板45℃±1℃培养3d～5d+1C接养20钻果判定图1浓缩果汁及其他果蔬汁生品中环状脂肪酸芽孢杆菌的检测程序1７ 操作步骤7.1原料(浓缩果汁和果蔬汁生品)中环状脂肪酸芽孢杆菌的检测。7.1.1　样品的稀释使用适当的灭过菌的工具和容器无菌采集具有代表性的样品，称取10g样品用蒸馏水（或去离子水）、YSG肉汤或BAT肉汤1：10进行稀释，混匀。7.1.2热处理将样品稀释液置于80℃土1℃恒温水浴锅中，水面高度须超过样品高度，通过指示温度计显示，使样品稀释液温度5min内上升至79℃～80℃，加热10min。取出样品稀释液,冷却至40℃～45℃，可用含冰的凉水进行冷却。7.1.3 过滤如果被热处理的样品稀释液可以过滤，需用直径0.45um的滤膜进行过滤。准备2个100mL热2 SN/T 3632-—2013处理过的样品稀释液，无菌过滤样品并用20mL清洗液（如无菌蒸馏水或去离子水）冲洗滤膜后，无菌取出滤膜,将第-个膜置于K琼脂上,另一个膜置于 YSG琼脂或 BAT琼脂上，避免气泡产生。与此同时，将对照菌株 A.acidoterrestris 和A.acidocaldarius 在相同平板上划线。该方法检出限为1 CFU/100 mL 或 1 CFU/10 g。7.1.4　增菌对于不能过滤的样品需进行增菌处理。将100mL加热处理的样品于45℃土1℃进行增菌培养，下一步