SN_T 1316-2011牛海绵状脑病检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1316—2011代替SN/T 1316-2003牛海绵状脑病检疫技术规范Quarantine protocol for bovine spongiform encephalopathy2011-05-31发布2011-12-01实施中华人民共和国x发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准牛海绵状脑病检疫技术规范SN/T 1316—2011*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. c话国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 ２ 字数 57 千字2011 年11月第一版2011年11月第一次印刷印数1—1 600* 书号：155066·2-22588 SN/T 1316--2011前 言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准代替 SN/T1316-2003《牛海绵状脑病病理组织学检查方法》。本标准与 SN/比，主要的技术性变化如下：增加了牛海绵状脑病的采样；增加了蛋白免疫印迹方法；增加了酶联免疫吸附试验方法（ELISA）；增加了免疫层析试纸条检测方法。本标准参考了国际动物卫生组织(OIE)的《诊断试验和疫苗标准手册》(2008 版)《Manual of Diag-nostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals》)中第 2.4.6 章“牛海绵状脑病的诊断技术”。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局起草。本标准主要起草人：马贵平、李炎鑫、李冰玲、刘全国、史喜菊、刘旭辉。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T SN/T 1316--2011牛海绵状脑病检疫技术规范1 范围本标准规定了牛海绵状脑病的采样、组织病理学检查方法、免疫组织化学方法、蛋白免疫印迹方法酶联免疫吸附试验方法、免疫层析试纸条检测方法等检测方法的技术要求和操作规范。其中组织病理学检查方法为免疫组织化学方法的辅助方法，免疫组织化学方法和SAF蛋白免疫印迹诊断为确诊方法，蛋白免疫印迹方法、酶联免疫吸附试验方法和免疫层析试纸条检测方法为筛选方法。本标准适用于牛海绵状脑病的诊断，也可用于其他动物的传染性海绵状脑病的诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489　实验室　生物安全通用要求3临床诊断3.1牛海绵状脑病(BSE)平均潜伏期为 4 年～5 年。病牛临床表现为精神异常、运动障碍和感觉障碍。3.2精神异常：主要表现为不安、恐惧、狂暴等，当有人靠近或追逼时往往出现攻击性行为。3.3运动障碍：主要表现为共济失调、颤抖或倒下。病牛步态呈“鹅步”状，四肢伸展过度，后肢运动失调、震颤和跌倒、麻痹、轻瘫;有时倒地难以站立。3.4感觉障碍：最常见的是对触摸、声音和光过度敏感，这是BSE病牛很重要的临床诊断特征。用手触摸或用钝器触压牛的颈部肋部，病牛会异常紧张颤抖，用扫帚轻碰后蹄，也会出现紧张的踢腿反应；病牛听到敲击金属器械的声音，会出现震惊和颤抖反应；病牛在黑暗环境中，对突然打开的灯光，出现惊吓和颤抖反应。4实验室诊断4.1采样及样品准备方法4.1.1材料被检组织待检牛脑。试剂10%中性福尔马林溶液（见附录A）；消毒液：2%次氯酸钠，2mol/L氢氧化钠；98%～99%甲酸；无水乙醇;95%乙醇溶液；70%乙醇溶液；二甲苯;石蜡（熔点为54℃～56℃,56℃～58℃，58℃～60℃）。1 SN/T 1316—20仪器设备脱水包埋盒、镊子、吸水纸、pH计、手术刀、专用取样勺、刀板、剪刀、锯、载玻片（多聚赖氨酸或其他等效物质处理过）、自动脱水浸蜡机、包埋机、冰箱、切片机、展片槽、烘干台、天平、箱（37℃）、pH计、计时器、安全设施、BⅡ生物安全柜、通风橱、一次性睛手套、防护服、防护面罩或口罩、防护眼镜、防切割手套、鞋套、尖锐废弃物容纳盒、灭菌锅（121℃）、蒸汽灭菌器（温度不低于135℃，且蒸汽不外排）。4.1.2方法牛脑组织的采集.1疑似患有 BSE的病牛在必要的情况下可以先注射镇静剂再用浓缩巴比妥盐溶液静脉注射处死。.2将头部与躯体从枕骨大孔和第颈椎之间分离，从断面孔可以看到脑干的尾部。.3用锯锯开颅骨,取出整个脑组织7包括天脑小脑和脑于）。.4·如果只取脑门部位，可以不锯开颅骨，用特制取样勺直接从枕骨大孔处进行取样。具体