SN_T 3527-2013化学品 胚胎毒性测试 植入后大鼠全胚胎培养法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3527-2013植入后大鼠化学品胚胎毒性测试全胚胎培养法Chemicals--Embryotoxicity test-Post-implantation embryo culture method2013-09-16实施2013-03-01 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3527—2013前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准参考了欧洲动物试验替代方法研究中心（European Centre for the Validation of AlternativeMethods,ECVAM)《体外植人后大鼠全胚胎培养法测试胚胎毒性》（DB-ALM:INVITTOX protocolembryotoxicity testing in post-implantation cmbryo culture INVITTOX n°123)(英文版)本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：程艳、崔媛、谢文平、陈会明、艾文超、马萍。一 SN/T 3527--2013化学品胚胎毒性测试植入后大鼠全胚胎培养法1范围本标准规定了植人后大鼠全胚胎培养方法检测化学品胚胎毒性的方法目的、方法原理、试验描述、试验体系、数据分析/预测模型、受试物、材料、方法和潜在胚胎毒性预测、评估。本标准适用于化学品胚胎毒性的筛查。2　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1半数致畸浓度 ICsofor malformations;IC5o50%的胚胎出现畸形的受试物浓度。2.2for inhibition of the growth of 3T3 cells; ICso(3T3)3T3细胞半数抑制浓度IC50(3T3）50%的3T3细胞生长受抑制的受试物浓度。2.3最大致畸浓度 ICmaxfor malformations ; ICmax导致最高畸形率的受试物最低浓度。2. 4 for total morphological score ; ICnoec总体形态学评分无效应浓度 ICnOEC对总体形态学评分没有效应的受试物最高浓度。3　方法目的植人后大鼠全胚胎培养方法检测胚胎毒性是为了识别引起畸形最终导致胚胎毒性的物质。4　方法原理4.1试验中采用含有1～5个体节的大鼠胚胎，比采用更大时期的胚胎对外源性物质更敏感。在 48 h的培养过程中，是器官形成的重要时期，例如心脏发育、神经管封闭、耳眼形成、肱动脉和肢芽形成。受试物在这个阶段进行染毒，可能会导致机体生长和发育迟缓或者造成一个或多个器官畸形。4.2胚胎在旋转的培养箱中进行培养，有利于培养液与其上方的气体交换。由于胚胎发育对于氧气的需要越来越大，气体交换对于培养液的最佳氧饱和度非常重要4.3测试完成后，评估胚胎的形态，将对照组和试验组的胚胎进行比较，得到受试物胚胎毒性结果。5试验描述5.1试验终点和终点检测5.1.1大鼠胚胎形态：形态变化（胚胎总体观察、包括体节个数、分化滞后、特定的畸形）。 SN/T 3527--20135.1.2大鼠胚胎功能：功能变化（心脏搏动、卵黄囊循环和尿囊循环）。5.1.3大鼠胚胎发育：胚胎生长发育（卵黄囊直径、冠臀长、头长）。5.1.4细胞成活力：细胞成活（心脏搏动、卵黄囊循环和尿囊循环）。5.2终点检测值畸形检测IC,,和ICmax；总体形态学得分（TMS)的ICxomc。5.3 试验体系5.3.1大鼠全胚胎培养。取9.5d孕龄的大鼠胚胎，每个胚胎培养皿加人2mL大鼠血清.采用合适的溶剂溶解受试物（如：Hanksbalanged_saltsalutianHBSSDMSO乙醇），在肝胚胎置人培养Ⅲ之前，向培养血清中加人标准体积的受试物容液，在对照纽中加人同体积的溶剂，这个体积的溶剂在预试验中不能干扰培养中胚胎的发育。5.3.2每个母体的胚胎均匀的分布在对照纽和各个试验组中，并互每个浓度组最开始的平均体节数一致。5.3.3设置相当数目的平行样，并对受试物浓度进行测试。5.3.4培养48h后，每个胚胎都被转移到含有HBSS.的培养Ⅲ中（37℃），按照培养的先后顺序对胚胎进行评分，测试终点的评分见9.6数据分析/预测模型6.1全胚胎培养方法采用精细的形态学评分系统，评价化掌品作用48h后胚胎出现畸形或发育迟缓的体征或胚胎的死亡。在ECVAM进行验证试验之前，化学性分级主要基于发生的效应性质，并由化学品最低有效浓度得出。在EVAM进行验证试验过想中，生物统计评价表明评分系统不能多重应用，因此开发了两套预测模型（AII·和!PM2）。6.2因为预测模型一（PM1)只考虑分化和发育方面的参数，故开发了预测模型二（PM2）。PM2纳人了分化的小