SN_T 1447-2011猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范.pdf

S中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1447---2011代替 SN/T 1447.1—2004,SN/T 1447.2—2005猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范Quarantine protocol for infectious pleuropneumonia of swine2011-05-31 发布2011-12-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范SN/T 1447--2011*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 1.5字数 41 千字2011年12月第一版2011年12月第一次印刷印数 1—1 600*书号：155066·2-22611 SN/T 1447-2011前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1447.1—2004《猪传染性胸膜肺炎阻断酶联免疫吸附试验》、SN/T1447.2—2005《猪胸膜肺炎放线杆菌聚合酶链式反应操作规程》。本标准与SN/T1447.1—2004和SN/T1447.22005相比，主要技术变化如下：-增加了细菌分离鉴定；-补体结合试验。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王巧全、李树清、张强、李健、胡永强、刘俊平、熊炜。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1447.1-2004;-SN/T 1447.22005。 SN/T 1447-2011猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范1范围本标准规定了猪传染性胸膜肺炎的细菌分离鉴定、聚合酶链式反应、补体结合试验、阻断酶联免疫吸附试验等实验室检测的操作程序及技术要求本标准适用于猪传染性胸膜肺炎的检疫、诊断、流行病学调查和免疫监测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T18088出入境动物检疫采样。3 疾病简介参见附录 A。4现场检疫及采样4.1现场检疫逐头进行临床检查，根据动物病情、临床表现和特异性病理变化做出初步诊断。4.2采样4.2.1病料的采集标准按GB/T18088规定采样。4.2.2活体病料采集用棉拭子采鼻腔分泌物，放人无菌试管中送实验室进行检验。4.2.3组织样品的采集无菌采集具有典型病变的肺气管、肺门淋巴结、扁桃体。4.2.4血样的采集制备无菌操作采集动物血，每头不少于10mL。自然凝固后无菌分离血清，分装，加盖密封后冷藏保存。5实验室诊断5.1　总则对该病可以进行细菌分离鉴定、分子生物学或血清学检查等。 SN/T 1447—2011其中细菌分离、聚合酶链式反应主要检病原,补体结合试验、酶联免疫吸附试验主要检抗体。5.2细菌分离鉴定5.2.1 试剂营养琼脂、血琼脂、巧克力琼脂、类胸膜肺炎微生物(PPLO)琼脂。5.2.2病原分离将样品按常规分离要求直接接种到血琼脂表面，再用鸡表皮葡萄球菌作交叉划线于37℃含5头二氧化碳(CO,）下培养。继代培养用巧克力琼脂和_PPLQ.琼脂进行培养。5.2.3病原鉴定培养形态及染色特性：于血琼脂平板培养 24 h～48 h,胸膜肺炎放线杆葡(APP)为露珠样的小菌落,直径1 mm～2 mm。多数菌株产生β溶血带，靠近鸡表皮葡萄球菌菌的菌落较大;随着与葡萄球菌生长线的距离增加而变小或不生长，即所谓“卫星现象”。取典型菌落作革兰氏染色，应为革兰氏阴性小球杆菌,两极着色继代培养中呈明显多形态，幼龄培养物中偶有成丝状。5.2.4 判定被分离菌具有以下特点即可初步判定为猪胸膜肺炎放线杆菌染色镜检为革兰氏阴性杆菌或多形态；在血琼脂培养基上生长具有溶血现象；-生长培养需要v因子，即具有“卫鼠现象”；被检菌生化特性:尿素酶试验为阳性，能分解D-木糖、甘露醇,本分解棉子糖、阿拉伯胶糖。5.3猪胸膜肺炎放线杆菌聚合酶链式反应5.3.1设备和材料仪器设备5.3.1. 1. 1PCR 扩增仪。5.3. 1.1.2 电泳仪。.3凝胶成像系统。5.3. 1.2试剂5. 3. 1. 2. 1三蒸水 0.103 MPa 灭菌 15 min。5.3. 1.2.2吐温-20(Tween-20)0.103 MPa灭菌15 min。5.3. 1.2.3 琼脂糖。5. 3. 1. 2. 4溴化乙锭。5.3. 1.2.5Taq 酶。.625mmol/L氯化镁。5.3. 1.2.7 2.5 mmol/L dNTP。5.