SNT 2529-2010进出口食品中香港海鸥菌检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2529-—2010进出口食品中香港海鸥菌检测方法Determination of Laribacter hongkongensis in foods for import and export2010-03-02 发布2010-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局巧草数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准进出口食品中香港海鸥菌检测方法SN/T 2529--2010中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×1230.1/16印张 0.75　字数 17 千字2010年5月第一版2010年5月第一次印刷印数 1—1 600*书号：155066·2-20861 SN/T 2529—2010前言本标准的附录 A、附录 B为规范性的附录、附录 C为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、广东出入境检验检疫局、杭州疾病预防控制中心。本标准主要起草人：李晓虹、韩伟、李志勇、倪晓平。本标准是首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2529—2010进出口食品中香港海鸥菌检测方法范围本标准规定了进出口食品中香港海鸥菌的检验方法。本标准适用于淡水鱼中香港海鸥菌的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的茶款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T27403　实验室质量控制规范~~食品分子生物学检测GB/T 27405‘实验室质量控制规范食品微生物检测SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T 1538.2：培养基制备指南第2部分:培养基性能测试实用指南3定义和术语下列术语和定义适用于本标准。3. 1香港海鸥菌 Laribacter hongkongensis,LH香港海鸥菌(Laribacter hongkongensjs,LH)，为变形菌门下Proteobacteria）、β-变形菌纲（Betapro-eaé)的→个新属。呈海鸥形或螺旋形杆状,兼性厌氧,不产芽孢，大小teobacteria）奈瑟菌科（Neisseriac直径在 0.5 mm～1 mm 之间的革兰氏阴性细菌设备和材料44.1恒温培养箱：36℃±1℃4.2吸管：1mL、5mL和10 mL;分刻度0.A1 mL4.3接种环:直径3 mm。4. 4天平:感量0.1g。4.5全自动细菌鉴定系统（VITEK:或同类仪器）4.6灭菌平皿:Ⅲ底直径9 cm。4.7浊度仪：法国生物梅里埃公司或同类仪器。4.8PCR扩增仪4.9台式离心机：最高离心力13000r/min。4.10恒温水浴锅:36℃士1℃。4.11均质器。4.12微量可调移液器。1 μL～10 μL,100 μL,200 μL,1 000 μL。4.13旋涡振荡器。4.14电泳仪。4. 15凝胶成像分析系统。4.16微波炉。5培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水和培养基配制应符合GB/T27405和GB/T27403 SN/T 2529—2010的规定。肠道菌增菌肉汤（EE肉汤）：见附录第A.2章。5.1头孢哌酮麦康凯(CMA)琼脂：见附录第 A.3章。5.25.3三糖铁琼脂(TSI)：见附录第 A.4 章。胰化大豆陈蛋白陈肉汤（TSB)：见附录第 A.5章。5.4绵羊头孢哌酮血平板：见附录第 A.6章。5.5 2 X Taq PCR Master MixEo. 1U Taq Polymerase/μL、500 μmol/L dNTP each.20 mol/L Tris-5.6HCl(pH 8. 3)、100 mol/L KCl,3 mol/L MgCl²。5.7 PCR引物见表1。表1香港海鸥菌引物序列及扩增片段长度扩增片段大小/bp引物序列（5′-3）引物名称424P2FaTTGAGGGTGCCCGAAAGGGAP2RbCTACCCACTTCTGGCGGATT5.8琼脂糖(电泳级）。5.9溴化乙锭。5.10DNA 抽提试剂盒。5. 11DNA marker.5. 12常用生化试剂。TAE电泳储备液（50X）：见附录第 A.7章。5.13API20NE生化鉴定试剂盒或类似产品5.14注：API20NE是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示