SN 1223-2003绵羊进行性肺炎抗体检测方法 琼脂免疫扩散试验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1223—2003琼脂绵羊进行性肺炎抗体检测方法免疫扩散试验The detection of antibodies against ovine progressivepneumonia virusProtocol of agar gel immuno-diffusion test2003-05-28 发布2003-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准绵羊进行性肺炎抗体检测方法琼脂免疫扩散试验SN/T 1223—2003*中国标出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标准出叛社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16印张1/2字数 11千字2003年9月第一版　2003年9月第一次印刷印数 1—2 000*书号：155066·2-15297网址 版权专有侵权必究举报电话：（010SN/T 1223—2003前言本标准的附录 A 是规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人：黄运生、李永学、罗卫、石新。 SN/T 1223—2003引言绵羊进行性肺炎（Ovine Progressive Pneumonia，OPP）或绵羊梅迪-维斯纳病（Maedi-ViGBa Dis-ease,MVD)是由 MV/OPP病毒引起的绵羊的一种持续性病毒感染,其特征为病程缓慢、进行性消瘦和呼吸困难，多表现间质性肺炎和脑脊髓炎症状。感染动物是主要传染源，目前已知仅有绵羊和山羊对本病易感，而且绵羊和山羊之间有交叉感染性。本病主要通过初乳传给新生羔羊，通过呼吸道水平传播，或通过污染的饮水、饲料和牧草传播。本病的潜伏期特别长，动物在接触病毒1年～3年或更长时间后才出现临床症状,继之呈进行性临床经过。感染动物可终身带毒，多数羊可出现临床症状和病变。在MV/OPP病毒感染中，中和抗体没有阻止病毒在血液中传播的作用。目前该病在饲养绵羊的多数国家已确定存在。MV/OPP临床和亚临床症状为在肺、乳房、中枢神经系统表现进行性单核细胞炎性病灶和硬结性乳腺炎。MV/OPP对绵羊的繁育和改良及绵羊的贸易造成了严重的影响，所造成的经济损失不能低估,该病已被国际兽疫局(OIE)列人B类疾病和我国农业部公布的二类传染病。由于多数感染病毒的绵羊和山羊呈现无症状，但能持续带毒并且通过初乳或哺乳、甚至通过呼吸道分泌物传播病毒，因此通过建立快速可靠的诊断方法来检疫该病是控制该病的重要手段。1 SN/T 1223—2003琼脂绵羊进行性肺炎抗体检测方法免疫扩散试验1范围本标准规定了绵羊进行性肺炎(梅迪-维斯纳病)抗体检测的操作方法和步骤。本标准用于检测绵羊进行性肺炎(梅迪-维斯纳病)病毒抗体,适用于本病的检疫、诊断、疫情监测和流行病学调查。2原理琼脂是一种含有硫酸基的多糖体,形成凝胶后呈多孔结构,孔径的大小取决于琼脂浓度。抗原和抗体的分子量一般都在20万以下，抗原及其特异性抗体在凝胶中从高浓度区域向低浓度区域扩散时受阻力很小，基本上呈自由扩散形式。由于不同抗原分子的分子量、结构、形状和电荷量不同，因此其扩散系数不同，在凝胶中的扩散速度也就不同。当抗原与相应抗体经扩散后在凝胶中相遇,形成抗原抗体复合物。若两者在相遇处比例适当，则形成最大的复合物。由于复合物的分子量增大，颗粒增大，因而不再继续扩散而产生沉淀，呈现出线状或带状的“特异性屏障”，称为免疫沉淀线或免疫沉淀带，因此，可根据抗原与标准阳性血清之间出现的这种沉淀线或沉淀带和抗原与被检血清之间是否出现沉淀线或沉淀带来判定被检血清中是否存在抗体。MV/OPP 病毒最重要的抗原有两种，一种是病毒的囊膜糖蛋白,通常称为 gP135;另-种为核心蛋白P28,制备这两种蛋白时收取感染细胞的培养液，经聚乙二醇透析浓缩50倍左右后获得的一种抗原制剂。以此抗原检测MV/OPP病毒抗体，特异性强，重复性好。从理论上讲，这两种抗原蛋白与其相应的阳性血清应该成两条沉淀线，但试验结果证明，几乎所有的被检阳性血清只形成一条明显的沉淀线。3材料准备3. 1试剂:琼脂糖、氯化钠、叠氮钠、Tris 碱、盐酸。3.2MV/OPP琼脂扩散试验抗原、标准阳性血清：由 OIE参考实验室或国家有关部门指定生产厂家或指定实验室提供，按说明书使用。3.3 被检绵羊血清:按常规方法采血，分离血清,56℃水浴灭能30 min。血清应无溶血、无细菌污染，保存于4℃。3.4器材：天平、吸管、量筒、平皿（规格为90.0mmX15.0mm）、三角瓶、外径为5.3mm的七孔梅花样金属打孔器、微量移液器和微量吸头、观察灯、水浴