SNT 1867-2007进出口贝类中软骨藻酸的检测方法 液相色谱-串联质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1867—2007进出口贝类中软骨藻酸的检测方法液相色谱-串联质谱法Determination of domoic acid in shellfish for import and export-LC-MS/MS method2007-10-16 实施2007-04-06 发布中华人民共和国发布要议180荐 查询真们国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1867—2007前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：方晓明、唐毅锋、樊祥、卫锋。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1867—2007进出口贝类中软骨藻酸的检测方法液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了进出口贝类样品中软骨藻酸的液相色谱-串联质谱检测方法。本标准适用于进出口贝类样品中的软骨藻酸检测2测定方法2.1方法提要试样中的软骨藻酸用甲醇-水提取，固相萃取柱净化后，液相色谱分离，串联质谱检测，外标法定量。2.2试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水或相适应的去离子水。2.2.1甲醇：液相色谱级。2.2.2乙腈:液相色谱级。2.2.3甲酸:纯度大于等于98.0%。软骨藻酸标准品（domoic acid，分子式 CisH2r NOe，CAS No.14277-97-5）：纯度大于等于2.2.497.0% .2.2.5甲醇：水（50：50,体积比）。2.2.6　乙腈：水(10：90,体积比）。2.2.7 0.1 mol/L甲酸水溶液。5%甲酸的乙腈溶液：取0.50mL甲酸加人至1L乙腈中。5%甲酸水溶液。2.2.10软骨藻酸标准储备液（100 ug/mL)：准确称取0.010g软骨藻酸于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。此储备液于一18℃中可保存半年。2.2.11软骨藻酸中间溶液(10 μg/mL)：移取1.00 mL软骨藻酸标准储备液（2.2.10)于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。此溶液于一18℃中可保存3个月。2.2.12空白样品提取液：空白样品提取液的制备同2.4.2。2.2.13软骨藻酸基质标准工作溶液：根据需要吸取适量软骨藻酸标准储备液(2.2.10)或软骨藻酸中间溶液（2.2.11），用空白样品提取液配制成适当浓度的基质标准工作溶液。基质标准工作溶液在一18℃保存,可使用1周。2.2.14SAX固相萃取柱:3mL(500mg),使用前小柱预先用6 mL甲醇、3mL水和3mL甲醇水溶液(2.2.5)淋洗,流速为 2 mL/min。2.3仪器和设备2.3.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。2.3.2固相萃取装置。2.3.3恒温氮吹装置。2.3.4组织捣碎机2.3.5均质机。 SN/T 1867—20072.3.6旋涡混合器。2.3.7离心机:最大转速 4000 r/min。2.3.8离心管:50 mL。2.4测定步骤2.4.1样品的制备从抽取的原始样品中取可食部分，放入组织捣碎机中搅碎至匀浆状，均分成两份，装人清洁的容器内，作为试样。密封，并标明标记。将试样于一18℃以下冷冻保存。在制样操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。2.4.2提取及净化称取试样4g(精确到0.01g），置于50mL离心管中，加人2×8mL甲醇：水（50：50,体积比），于12000r/min均质3min，于3800/min离心10min，合并上清液再用甲醇：水（50：50，体积比）加补到20.0mL。取5.0mL上清液(相当于含1.0:g样品)过SAX固萃取柱，加5mL乙腈：水(10：90，体积比)和0.5mL 0.1mol/L酸溶液淋洗；流速2mL/min,最后用3.0 mL 0.1mol/L甲酸溶液洗脱，并收集，柱中液体流完后，保持抽气2min，最后用0.1.mol/L甲酸溶液定容到3.0mL，供测试。2.4.3测定液相色谱条件a)色谱柱：150mm×2.1 mm粒径3.5μm;2rbax XDB-C18，或相当者;预柱 20 mmX3.9 mm,粒径 5μm，Symmetry柱或相当者；b）流动相：溶剂A，0.05%甲酸的乙睛溶液；溶剂B,0.05%甲酸水溶液；1c）梯度淋洗：梯度淋洗见美d)流速:0.2 mL/mine)柱温:22℃;f)进样量:10 μL。表梯度淋洗表时间/min(溶剂A/(%)溶剂 B/(%)梯度曲线-.5019562020.806130.5.95质谱条件a)离子化模式：电喷雾正离子模式(ESI+）;b)锥电压：50V;c)源温度：105℃；d)喷雾温度：250℃；e)毛细管电压：3.0kV