SNT 2206.6-2010化妆品微生物检验方法 第6部分：破伤风梭菌.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2206.6—2010化妆品微生物检验方法第6部分：破伤风梭菌Determination of microbiological in cosmetics-Part 6 :Clostridium tetani2010-01-10 发布2010-07-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局、数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准化妆品微生物检验方法第6部分：破伤风梭菌SN/T 2206.6—2010*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16　印张 0.5字数 ９千字2010年4月第一版　2010年4月第一次印刷印数1—1600￥书号：155066·2-20679 SN/T 2206.6—2010前 言SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为以下部分：-第1部分：沙门氏菌；第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；第3部分：肺炎克雷伯氏菌；第4部分：链球菌；第5部分：肠球菌；-第6部分：破伤风梭菌。本部分为SN/T2206的第6部分。本部分的附录 A为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：范放、朱海、唐少冰、赵芳、匡燕云。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2206.6—2010化妆品微生物检验方法第6部分：破伤风梭菌范围7SN/T2206的本部分规定了化妆品中破伤风梭菌的检测方法。本部分适用于各类化妆品中破伤风梭菌的检测。2.规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2206本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本部分。GB/T 19489　实验室　生物安全通用要求化妆品卫生规范（卫生部，2007）3方法提要根据破伤风梭菌特有的形态、生物学特征及培养特性，采用厌氧培养法，应用血琼脂平板进行分离，并根据该菌在血平板上菌落周围产生β型溶血环,呈迁徙性生长,革兰阳性梭菌,过氧化氢酶阴性等特征以兹鉴别，以小白鼠毒力试验为最终结果判定，对化妆品中可能存在的破伤风梭菌进行定性检验。4设备和材料4.1培养箱:36℃±1℃。4.2显微镜。4.3厌氧培养装置。4.4　天平：量程1kg,感量0.1g。4.5灭菌样品处理器具：取样勺、剪刀等。4.6样品稀释瓶、试管、吸管、平皿、接种环、载玻片等。4.7 注射器:1 mL。4.8小白鼠。5 培养基和试剂生理盐水（见附录A第 A.1章）。5.15.2厄肉培养基（见附录 A第 A.2章）。5.3血琼脂平板（见附录 A第 A.3章）。5.4革兰氏染色液。5.5过氧化氢酶试验试剂。5.6破伤风抗毒素。6破伤风梭菌检测方法6.1检测程序破伤风梭菌的检测程序见图1。 SN/T 2206.6—20101：10样品稀释液增菌培养36℃±1℃厌氧培养48h～72 h分离培养36℃±1℃厌氧培养48 h～96 h染色镜检观察菌落性状过氧化氢酶试验增菌产毒培养毒力测定结果报告图1破伤风梭菌检测程序示意图6.2 操作步骤6.2.1取样不同类型化妆品的检样制备参照《化妆品卫生规范》。6.2.2增菌培养取1：10样品稀释液1mL,共3份，分别加至3,管疱肉培养基中,其中一管加入新鲜培养的破伤风梭菌对照菌液0.05mL,为阳性对照。另取一管为阴性对照。将以上各管移入厌氧装置或厌氧培养箱36℃士1℃培养 48 h～72 h。阳性菌使肉汤混浊，肉渣部分被消化,微变黑,有腐败臭味。注：如实验室具备厌氧工作站等较好的厌氧培养条件，增菌培养基表层可不加液体石蜡。6.2.3分离培养取增菌培养液划线接种血琼脂平板,36℃土1℃厌氧培养48 h。在此平板上破伤风梭菌呈白色或乳白色，中心紧密、周边疏松，直径 1 mm 以上，菌落周围产生透明β型溶血环，呈迁徙性生长的特征菌落。6.2.4革兰氏染色镜检取可疑菌落涂片、染色、镜检。破伤风梭菌为革兰氏阳性，营养期细菌呈细丝状,芽孢期细菌产生的芽孢圆形，位于菌体末端，直径比菌体宽大，似鼓状，其繁殖体为革兰氏阳性，带上芽孢的菌体有时转为革兰氏阴性。观察芽孢37℃培养96 h比较适宜，时间过短芽孢太小或是还没有完全形成，时间过长芽孢大部分会脱落。6.2.5过氧化氢酶试验挑取固体培养基上可疑菌落于洁净载玻片上，滴加一滴3%过氧化氢（H2O2)溶液，于30s内产生2 SN/T 2206.6--2010气泡者为阳性，,不产生气泡者为阴