WS_T 632-2018巴贝虫检测 血涂片镜检法.pdf

ICS 11. 020C 61Ws中华人民共和国卫生行业标准WS/T 632—2018巴贝虫检测血涂片镜检法Detection of Babesia spp.--Blood smear microscopy examination method2018 -09-26 发布2019－04－01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布 WS/T 632—2018前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、第二军医大学、中国农业科学院上海兽医研究所。本标准起草人：张仪、周晓农、刘琴、陈韶红、朱淮民、周金林I WS/T 632—2018』血涂片镜检法巴贝虫检测1范围本标准规定了检测巴贝虫的血涂片镜检法。本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对巴贝虫的检测。22规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。WS/T569疟原虫检测血涂片镜检法WS/T564巴贝虫病诊断3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1巴贝虫Babesia spp.类寄生于人和脊椎动物红细胞内的原虫，可引起巴贝虫病（Babesiosis）。感染人体的巴贝虫有田鼠巴贝虫(Babesia microti)、分歧巴贝虫(B.divergens)、邓肯巴贝虫(B.duncani)和猎户巴贝虫(B.venatorum)等。3. 2 血涂片blood smears将血液涂制于载玻片上制成的涂片，分为厚血膜涂片和薄血膜涂片。4仪器和器材4.1光学显微镜（100×油镜、10×目镜）4. 2血涂片染色架4. 3血涂片干燥架4. 4玻片盒4. 5染色盘和染色缸1 WS/T 632—20184.6计数器5 i试剂和材料5.1吉氏染色原液（Giemsa)5. 2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）5.3标准级载玻片（洁净载玻片，或表面带正电荷的粘附玻片）5.4甲醇（分析纯)5.5香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）5. 6，二甲苯(分析纯）5.7甘油6检测步骤6.1血涂片的制作6.1.1采血部位及取血方法末梢（无名指指尖或耳垂）取血。用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精挥发后，用拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，另一只手手持一次性采血针迅速刺入皮肤，轻轻挤压出血。婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血。6.1.2厚血膜制作取1张已消毒的载玻片（或粘附玻片）作推片，用推片的一角，取4μL～5μL的血量，使血与另张平置的载玻片（或粘附玻片）中央偏右的位置接触，由里向外旋转，画2圈～4圈，涂成直径0.8cm～1cm大小圆形厚血膜（见附录A）。6.1.3薄血膜制作干棉球抹净推片下角的血渍，用同一张推片中部取约1μL~1.5μL的血量。将血置于离厚血膜左边缘约0.3cm的位置，推片的边缘紧贴载玻片，上下轻轻移动，使血沿推片的边缘散开至2cm宽，使两张玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推动推片向前，推成舌状薄血膜（见附录A）。6.1.4编号血涂片制好后水平放置，充分干燥后，在玻片一侧毛玻璃上或在靠近厚血膜一端边上标注编号和日期。6.2固定与溶血6.2.1薄血膜固定将薄血膜一端朝下呈45°角，用一次性吸管吸取甲醇溶液，均匀轻抹于薄血膜表面，避免碰触厚血膜。2 WS/T 632—20186.2.2厚血膜溶血在干燥的厚血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟，待血膜呈浅灰色，倾去溶血血液。6.3吉氏染色6.3.1吉氏染液的配制常用的吉氏染液工作液包括2%、3%、10%三种浓度，分别由吉氏染液原液和pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）按比例配制，也可购买商品化吉氏染液原液加实验用纯水按比例配制（见附录B）。6.3.2吉氏染色染色方法见附录B6.4显微镜检查在染色后的血涂片上加1滴香柏油或专用浸油，用100×（倍）油镜、10×（倍）目镜的光学显微镜检查。观察血片路线顺序为薄血膜从尾部舌尖部分开始，厚血膜从上端或下端开始（见附录A）。6.5结果判定6.5.1巴贝虫检测阳性血膜中发现巴贝虫判定为阳性（参见附录C）。6.5.2巴贝虫染虫率计数6.5.2.1薄血膜的巴贝虫染虫率计数法显微镜下检查薄血膜，计数每个视野中的染虫红细胞和红细胞总数2000个以上。用下式计算巴贝虫染虫率。染虫红细胞巴贝虫染虫率=×100% 。红细胞总数6.5.2.2厚血膜的巴贝虫染虫率计数法若染虫率低于0.1%时，显微镜下检查整张厚血膜片，计数整张厚血膜片的巴贝虫虫体数和红细胞总数。用下式计算巴贝虫染虫率。整张厚血膜片的巴贝虫虫体数巴贝虫染虫率=×100%（红细胞数男性按500万个/uL血、女性按4