SN 1611-2005南方菜豆花叶病毒血清学检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1611—2005南方菜豆花叶病毒血清学检测方法Serological detection method of southern bean mosaic sobemovirus2005-08-18 发布2006-02-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准南方菜豆花叶病毒血清学检测方法SN/T 1611—2005*中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 0.5字数 ８ 千字2005年11月第一版2005年11月第一次印刷*如有印装差错香　由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：（010SN/T言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陶庭典、朱水芳、易建平、杨翠云、印丽萍、朱伟祖。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。一 SN/T 1611--2005南方菜豆花叶病毒血清学检测方法1 范围本标准规定了南方菜豆花叶病毒的 DAS-ELISA 检测方法。本标准适用于豆科作物种苗中南方菜豆花叶病毒的检测。对于检测豆科作物种子中的南方菜豆花叶病毒时,其种子须经发芽或种植并形成小苗后再进行检测。2 缩略语下列缩略语适用于本标准。2.1 DAS-ELISA:双抗体夹心 ELISA Double antibody sandwich ELISA。2.2 PBS:磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline。2.310×PBS:10 倍浓度的 PBS母液。2. 4 PBST:含 Tween-20 的 PBS.2.5 SEB:样品抽提缓冲液 Sample Extraction Buffer。2.6CB:包被缓冲液Coating Buffer。3 病毒概述3. 1 病毒学名Southern bean mosaic virus,缩写: SBMV。3. 2病毒粒体等轴对称的二十面体，直径约 30 nm。3.3病毒分类属于南方菜豆花叶病毒属（Sobemovirus),是该属的典型成员;尚未划分到特定的科。3. 4病毒稳定性体外存活期：18℃～22℃下20 d～165d,稀释限点：10-5～10-8,致死温度:90℃～95℃(10min)。3.5自然膏主主要是豆科作物中的菜豆和豇豆。3.6　分布发生在美洲和非洲的温热带地区,法国和亚洲的印度也有报道。3.7传播主要通过豆科作物的种子进行远距离传播。3.8 血清学特性病毒具有极强的免疫原性，抗体效价：1：2048～1：4096（微量沉淀法）。免疫电镜法和ELISA方法适合于组织汁液中病毒的检测。3.9株系南方菜豆花叶病毒分为B株系（Bean strain）、C株系（Cowpea strain）、G株系（Ghana strain）、M株系(Mexican strain)等，但各株系之间存在密切的血清学关系，因此不会因为所使用的抗血清是来自于不同株系而产生漏检的情况。4仪器或器具4.1酶联板。 SN/T 1611--20054.2可调式移液器(2.5 μL、10 μL、100 μL、200 μL、1 000 μL各一支)及相应吸头。4.312孔道200μL可调式移液器及吸头。4.4酸度计。4.5调温水浴锅或调温培养箱。4.6ELISA洗板机可选。4.7酶标仪。4.8微量样品榨汁机（无微量样品榨汁机时，可用研钵进行手工研磨制样）。4.9 量筒(10 mL、20 mL、50 mL、100 mL.500 mL、1 000 mL 各一个)。4.10分析天平精度　1/10000g。4.11 试剂瓶(10 mL、50 mL、100 mL、500 mL、1 000 mL各两个)。4. 12²封口膜。4.13吸水纸。5 试剂、溶液及生物制剂本标准中所有化学试剂除特别说明外其纯度均为分析纯，实验用水至少是蒸馏水。5. 110 × PBS 磷酸盐缓冲液81.8 g氯化钠(NaCI)氯化钾(KCI)1. 49 g2.72 g磷酸二氢钾(KH2PO.)14.2 g磷酸氢二钠(NazHPO.·2H²O)加水定容至 1 L。5. 2PBS 磷酸盐缓冲液10 × PBS100 mL水850 mL调节 pH 至 7.4 后再用水定容至 1 L。5. 3PBST 洗板缓冲液在 PBS中加人 Tween-20,使 Tween-20的浓度为 0.1%（体积比）)。5.4SEB样品抽提缓冲液在 PBS 中加人以下试剂配制 SEB:PVP(终浓度为2%,PVP御聚乙烯吡