SN_T 2668-2010转基因植物品系特异性检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2668-2010转基因植物品系特异性检测方法Event-specific method for the detection of genetically modified plants2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局专数码防伪 SN/T2668--2010前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈红运、梁新苗、陈双雅、赵文军、黄文胜、曹际娟、潘良文、朱水芳、陈洪俊 SN/T 2668--2010转基因植物品系特异性检测方法1范围本标准规定了几种重要的转基因植物品系特异性（转化事件特异性）检测方法。本标准适用于转基因玉米（Bt10，Bt11，GA21，Mon810，Mon863，NK603，T25，TC1507）、转基因大豆（GTS-40-3-2，A2704-12）、转基因油菜（RT73，T45，Ms8，Rf3）、转基因番茄（华番1号）和转基因马铃薯（EH92-527-1)的品系特异性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1193基因检验实验室技术要求SN/T1194植物及其产品中转基因成分检测抽样和制样方法3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1转基因植物genetically modified plant目的基因（包括外源和内源基因两类）导人植物基因组并能在后代中稳定遗传的植物。3.1.2转基因植物品系genetically modified plant event目的基因成功导入植物基因组并能在后代中稳定遗传即获得转基因植物品系，同基因的不同转化体视为不同的品系。品系特异性序列指外源插人片段与植物基因组的连接区序列，是转基因植物品系的鉴定依据。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。Adhl（alcoholdehydrogenase）：乙醇脱氢酶基因，玉米内源基因bp（basepair）：碱基对Ct值（Cyclethreshold）：每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数CruA（CruciferinAgene）：油菜种子贮存蛋白，油菜内源基因dATP（deoxyadenosinetriphosphate）：脱氧腺苷三磷酸dCTP（deoxycytidinetriphosphate）：脱氧胞苷三磷酸dGTP(deoxyguanosine triphosphate）：脱氧鸟苷三磷酸DNA（deoxyribonucleicacid）：脱氧核糖核酸1 SN/T 2668--2010dNTP（deoxyribonucleosidetriphosphate）：脱氧核苷三磷酸dUTP（deoxyuridinetriphosphate）：脱氧尿苷三磷酸Hmg(highmobilitygroupprotein）：高迁移率族蛋白，玉米内源基因Lec（Lectin）：凝集素基因：大豆内源基因Pg（polygalacturonase）：多聚半乳糖醛酸酶，番茄内源基因PCR（polymerasechainreaction）：聚合酶链式反应，简称PCRTag酶：DNA聚合酶。Tris（tris（hydroxymethyl）aminomethane）：三（羟甲基）氨基甲烷TE(Tris-CI):EDTA缓冲液UGPase(UDP-glucose Pyrophosphorylase)：尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶，马铃薯内源基因UNG酶（UracilN-glycosylase）：尿啶-N-糖基化酶，也称为尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG）4防污染措施普通PCR和实时荧光PCR检验过程的防污染措施应符合SN/T1193的规定。5抽样与制样按照SN/T1194的规定执行。6实验方法6.1原理品系特异性检测，也称作转化事件特异性检测，是在品系特异性序列上设计一对特异性引物，两条引物分别位于外源DNA和植物基因组，通过PCR扩增即可判定样品中是否含有特定的转基因植物品系，在反应体系中加入荧光探针即可完成实时荧光PCR检测。TaqMan荧光探针技术，指在PCR反应体系中加人一对引物的同时再加人一条特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭