NY_T 1900-2010畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范.pdf

ICS 65.020.30B 43NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1900—2010畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范Procedures for cell and embryo cryopreservation of domestic animals2010-07-08 发布2010-09-01 实施中华人民共和国农业部发布3 NY/T 1900—2010前言本标准遵照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归口。本标准起草单位：全国畜牧总站。本标准主要起草人：刘丑生、王志刚、赵俊金、史建民、孟飞、于福清、孙飞舟、邱小田。I NY/T 1900—2010畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范1范围本标准规定了用于保种的家畜精液、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞冷冻保存技术要求。本标准适用于家畜精液、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞等遗传物质冷冻保存和检验人库。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 4143牛冷冻精液GB 20557山羊冷冻精液NY/T1234牛冷冻精液生产技术规程NY/T 1674牛羊胚胎质量检测技术规程3术语及定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 cryopreservation超低温保存在液氮中冷冻保存遗传物质的技术。3. 2卵母细胞oocyte来源于有腔卵泡具有繁殖能力的细胞。3. 3成纤维细胞fibroblast以畜禽组织或胎儿为材料，体外培养、分离出的梭形或不规则形细胞。胞质近中央处有椭圆形胞核，胞体一般铺展很开，细胞之间排列蔬松，有较大细胞间隙。3. 4供体　donor提供精液、卵母细胞、成纤维细胞或胚胎的个体。4细胞冷冻保存4.1家畜精液冷冻保存4.1.1数量每个品种保存精液不少于3000剂（猪0.5mL细管不少于30000剂），每个品种公畜不少于10头每个个体保存冻精不少于300剂。4.1.2供体符合其品种特性、特征；三代以内无亲缘关系，系谱清楚；健康、无传染性疾病、遗传疾病；有检疫证1 NY/T 1900—2010明。4. 1.3剂型牛、羊、鹿、犬 0.25mL细管;马、驴 0.5mL 细管;猪 0.5mL 细管或 5 mL细管。4.1.4标记标明生产单位、品种、供体号和生产日期。4.1.5精液冷冻牛冷冻精液制作应按NY／T1234的规定执行；山羊和绵羊冷冻精液制作按GB20557的规定执行;其他家畜精液冷冻程序参照NY/T1234和GB 20557的规定执行；不同家畜精液冷冻稀释液配方见附录 B。4.1.6质量检测牛冷冻精液质量检测按GB4143的规定执行；山羊冷冻精液质量检测按GB20557的规定执行；其他家畜冷冻精液的质量检测按GB4143的规定执行，具体指标要求见附录C。4.2卵母细胞冷冻保存4.2.1数量每个品种保存卵母细胞不少于1000个，牛和绵羊每个品种母畜不少于50头，每个个体保存卵母细胞不少于20个;其他家畜每个品种母畜不少于35头，每个个体保存卵母细胞不少于30个。4.2.2供体供体要求同4.1.2。4.2.3剂型0.25mL细管,每支含卵母细胞不多于 10个;OPS玻璃化冷冻每剂不多于5个。4.2.4标记标记要求同4.1.4。4.2.5卵母细胞的采集与冷冻卵母细胞的采集与冷冻参照附录 D。4.2.6质量检测卵母细胞冷冻一解冻后达到 A级或 B级。4.3成纤维细胞冷冻保存4.3.1数量公畜禽不少于10头（只），母畜禽不少于25头（只），每个个体体外培养第3～4代细胞6管，细胞密度为1X×105个/mL～5×105个/mL。4.3.2供体供体要求同4.1.2。4.3.3剂型2 mL冻存管。4.3.4标记标明生产单位、品种、细胞来源、供体号、性别、培养代数、冻存编号和冻存日期。4.3.5成纤维细胞的体外培养和冷冻保存成纤维细胞的体外培养和冷冻保存方法参照附录E。4.3.6质量检测台盼蓝染色检查细胞存活力80%以上，生长曲线与冷冻前体外生长曲线相近，核型正常，无病原菌和支原体。具体方法参照附录E。2 NY/T 1900—20105胚胎冷冻保存5.1数量每个品种冷冻保存体内胚胎不少于200枚，每个品种公畜不少于10头，母畜不少于25头，每个种公畜配种获得的胚胎数不少于20枚,冻前胚胎质量为A级。5.2供体供体要求同4.1.2。5.3 剂型0.25 mL细管,每支细管1枚～2 枚。5.4标记标明生产单位、品种、公畜号、母畜号、胚胎发育期、冷冻方法、等级、数量和生产时间。5.5胚胎采集和冷冻保存胚胎采集和冷冻保存方法参照附录 F。5.