SN_T 3064.2-2011国境口岸蝇类、蜚蠊携带重要病原体检测方法 第2部分：沙门氏菌.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3064.2-2011国境口岸蝇类、畵镰携带重要病原体检测方法第2部分：沙门氏菌Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port-Part 2 : Salmonella2012-04-01实施2011-09-09 发布中华人民共和国发布D国家质量监督检验检疫总局数码防伪。 SN/T 3064.2--2011前言SN/T3064分为11个部分：第1部分：通用要求；第2部分：沙门氏菌；第3部分：志贺氏菌；第4部分：致泻性大肠杆菌；第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌；第6部分：霍乱弧菌；第7部分：副溶血性弧菌；-第8部分:金黄色葡萄球菌;第9部分：蜡样芽孢杆菌；第10部分：甲型肝炎病毒；一第11部分：寄生虫卵（包囊）。本部分为SN/T3064的第2部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：高旗利、关淳、苏毅、张霞、张海滨、刘培、王乃福。1 SN/T 3064.2—2011国境口岸蝇类、畫携带重要病原体检测方法第2部分：沙门氏菌1范围SN/T3064的本部分规定了国境口岸输入性蝇类和蟹携带沙门氏菌的检测方法、结果判断、结果报告、阳性结果处置及强毒血清型的鉴定。本部分适用于检验检疫机构对输人性蝇类和蟹携带沙门氏菌的检测和报告。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T4789.4—2008　食品卫生微生物学检验～沙门氏菌检验SN/T0170—1992出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法3样本检测3.1设备和材料VIDAS全自动免疫荧光酶标分析仪3.2 培养基和试剂需要的培养基和试剂为缓冲蛋白陈水（BPW），四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB)，亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC），亚硫酸铋琼脂（BS），HIE琼脂，科玛嘉沙门氏菌壶色培养基（CHROMagar SalmonellaPlus）1），营养琼脂（NA)，三糖铁琼脂(TSI），赖氨酸脱辉酶培养基（LD)/尿素酶琼脂（U)，V-P半固体琼脂（VP)，吲哚培养基(I)，氰化钾培养基（KCN)。具体分及制备方法见GB/T4789.4--2008。除另有规定外，所用试剂为分析纯或生化纯，水为蒸馏水。除上述培养基和试剂外还需沙门氏菌属诊断血清和VIDASSLM测试条 1。3.3检测程序沙门氏菌检测程序参见附录A。3.4操作步骤3.4.1前增菌分别取1mL样本处理液加人到100mL缓冲蛋白陈水中,将加有样液的缓冲蛋白陈水于36℃±1℃1）VIDAS全自动免疫荧光酶标分析仪及其VIDASSLM测试条是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名，科玛嘉沙门氏菌显色培养基(CHROMagar Salmonella Plus)是由法国博赛科玛嘉公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1 SN/T 3064.2-2011下,培养 8 h～18 h，进行前增菌。3.4.2增菌具体操作步骤见 GB/T 4789.4—2008 中 5.2。3.4.3VIDAS快速筛选（可选择）取上述增菌液，按仪器生产厂商提供的操作指导手册进行快速筛选检测，45min可获初步结果对于筛选为阴性的结果可直接报告样本中未检出沙门氏菌；对于筛选为阳性的结果，继续进行分离与鉴定。3.4.4分离具体操作步骤见GB/T 4789.4—2008中5.3。3.4.5纯培养从 BS和 HE(或科玛嘉沙门氏菌显色平板)上各挑取2个～5个可疑菌落，划线接种 NA平板上、置36℃士1℃,培养过夜,进行以下试验。3.4.6初步生化筛选具体操作步骤参见SN/T0170—1992中4.1.1。判定按表1或表2结果进行。表 1三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶初步判定斜面底层产气培养基硫化氢KA十()+(-)可疑沙门氏菌属KA+(-)+(-)可疑沙门氏菌属?A+(-)+(-)+可疑沙门氏菌属AA+(-)+(-)一非沙门氏菌属KK+/-+/-+/-非沙门氏蔺属注： K-产碱；阳性反应；（一）)少见阴性反应；A--产酸；--阴性反应；十/--阳性或阴栏反应。表 2 三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选三糖铁琼脂尿素酶琼脂初步判定斜面底层产气硫化氢KA+(一)+(-)可疑沙门氏菌属AA+(-)+(-)可疑沙门氏菌属KA+(-)+(「)非沙门氏菌属AA+