NY_T 2890-2016稻米中γ-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.050B 20NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2890—2016稻米中-氨基丁酸的测定高效液相色谱法Determination of y-aminobutyric acid in rice-HPLC2016-05-23 发布2016-10-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T2890—2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：云南省农业科学院质标准与检测技术研究所、农业部农产品质量监督检验测试中心（昆明）。本标准主要起草人：江禄祥、黎其万、邵金良、刘兴勇、王丽、刘宏程、杨东顺、樊建麟1 NY/T 2890—2016稻米中-氨基丁酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了稻米中-氨基丁酸含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于稻米中-氨基丁酸含量的测定。本方法检出限为0.10mg/kg，定量限为0.20mg/kg，2规范性引用文件下列义件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用义件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的引用义件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本义件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样经乙醇一水溶液提取，经4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯（DABS-CI)衍生.用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。4试剂与材料除非另有规定，使用试剂均为分析纯。水为GB/T6682中规定的一级水。4.1无水乙醇(CH.()H)：优级纯。4.2乙晴(CHCN)：色谱纯4.3提取溶液：无水乙醇+十水=4十1(V+V），取400ml.无水乙醇和100ml.水混勺。4.4碳酸氢钠溶液：称取0.40g碳酸氢钠，用水溶解并稀释至10ml，现配现用。4.54-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯溶液：称取4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯20.0mg,用乙腈溶解并稀释至10ml，现配现用。4.6三水合乙酸钠溶液：称取3.40g三水合乙酸钠.用水溶解并稀释至500ml.经微孔滤膜（4.10)过滤。4.7 -氨基丁酸(-aminobutyric acidGABA):CAS号56-12-2,纯度≥99.9%。4.8标准储备溶液：精确称取-氨基丁酸标准品10.0mg，用乙睛溶液溶解并定容至10ml，即为1000mg/L的标准储备液，于一18℃下，贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，保存有效期为3个月。4.9标准使用液：在使用中将标准储备溶液逐级稀释成2.0mg/I、5.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/I和100.0mg/L或其他浓度的-氨基丁酸标准使用液，现配现用。4.10滤膜：0.45um，水相滤膜。5仪器与设备5.1高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器，5.2组织捣碎机：转速1000r/min。5.3分析天平：感量为0.01mg.0.01g5.4振荡水浴锅。I NY/T 2890—20165.5超声波清洗器。5.6旋涡混匀器。5.7离心机：最大转速10000r/min。6分析步骤6.1试样制备样品经混匀后.缩分至约50g.经研磨至全部通过孔径0.25mm（60日）筛的试样，混匀，装入密闭容器中，室温下保存。6.2提取称取1.0g样品于50ml.离心管中，加入10ml提取溶液（4.3），超声提取30min后，在旋涡混匀器上振荡2min，静置5min，于5000r/min离心5min，将上清液转人25mL容量瓶中，样品残渣再用10ml提取溶液（4.3）提取1次，合并2次提取液，用提取液（4.3）定容至25mL，摇匀，待衍生化。6.3衍生化准确吸取1ml试样溶液或标准工作溶液于具塞试管中，加人0.20ml.碳酸氢钠溶液（4.4）和0.40ml.4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯衍生试剂（4.5），混匀后在70℃水浴中衍生反应20min，用微孔滤膜（4.10）过滤，待测。6.4测定6.4.1色谱参考条件色谱柱：C1g柱，250mm×4.6mm，5um；或与之性能相当者；检测波长：436nm；柱温：30℃；进样量：10uL；流动相：乙晴（4.2）十三水合乙酸钠溶液（4.6）（35十65）；流速：1.0mL/min。6.4.2色谱分析分别将标准溶液和试样溶液.注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定。色谱图参见附录A。7 结果计算试样中-氨基丁酸含量按式(1)计算。w=pXV(1)m式中：w试样中-氨基丁酸含量，单位为毫克/千克（mg/kg);β—样液中-氨基丁酸测定质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)；V-一定容体积，单位为毫升（ml.）；试样质量，单位为克（g)；077—测定结果取两次测定的算术平均值，计算结果保留三位有效数字。8精密度在重复性条件下.获得的两次独立测定结果的绝对差值