SN_T 3892-2014麦类壳多胞斑点病菌检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3892—2014麦类壳多胞斑点病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Stagonospora avenae Bissett f.sp.triticeaT.Johnson2014-08-01实施2014-01-13发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局层变嘉伪 SN/T3892—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王英超、封立平、李建勇、甘琴华、吴兴海、厉艳、纪瑛、魏晓棠、邵秀玲、张京萱、白桦、吴翠萍。 SN/T 3892—2014麦类壳多胞斑点病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了麦类壳多胞斑点病菌疫鉴定方法。本标准适用于进出境小麦、大麦和黑麦种子、组培苗中的麦类壳多胞斑点病菌的鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1809进出境植物种子检疫规程3病菌基本信息学名 : Stagonospora avenae Bissett f,sp.triticea T.Johnson; Phaeosphaeria avenaria f.sp.triticeaT.W.Johnson1947(有性态）。异名:Septoria avenae A.B.Frank f.sp.Triticea ; Leptosphaevia avenaria G.F.Weber f.sp.triticea（有性态）。分类地位：麦类壳多胞斑点病菌（Stagonosporaavenae.Bissettf.sp.triticeaT.Johnson）无性态属于半知菌亚门（Deuteromycotina），腔菌纲（Coelomycetes）；球壳孢目（Sphaeropsidales），壳多孢属（Stagonospora）；有性态属子囊菌门（Ascomiycota)座囊菌纲（Dothideomycetes），格孢菌目（Pleospora-les),Phaeosphaeria 属。传播途径：植物残体和种子是远距离传播的主要途径。病菌的其他信息参见附录A。4方法原理麦类壳多胞斑点病菌的形态特征、生物学特性、寄主范围等是该检疫鉴定方法判定的主要依据。5仪器设备和主要试剂5.1仪器设备生物显微镜（具油镜镜头）、具透射光源的体视显微镜（最大放大倍数不低于50×）、超净工作台、电子天平、光照恒温培养箱、酒精灯、高压灭菌器、培养Ⅲ（直径9cm）、医用手术剪、镊子、烧杯（5mL、10mL）、试管（直径12mm）、载玻片、盖玻片、三角瓶（250mL）、量筒（500mL）。5.2主要试剂蒸馏水、1%次氯酸钠、PDA培养基、水琼脂培养基、啤酒麦芽琼脂培养基、酵母提取物琼脂培养基、小麦粉琼脂培养基，配方参见附录B。 SN/T3892--20146现场检疫按SN/T1809进行现场检疫，仔细检查寄主植物的叶等部位，是否有叶枯症状。对可疑植物和繁殖材料应取样送实验室做进一步检验，参见附录A。7实验室检疫7.1病原菌检查用解剖针挑取或刀片刮取病斑或病组织表皮下小黑点制片，在显微镜下观察病菌的分生孢子器和假囊壳，记录其形态特征，测量分生孢子、子囊和子囊孢子的大小。得到的孢子进行单胞分离纯化。7.2分离培养7.2.1组织中病菌的分离如果发现可疑症状，但不能按7.1获得分生孢子器和假囊壳，应采取下列分离培养的方法作进一步的鉴定。将病株在自来水流水下冲洗10min～30min，在病斑边缘病健交接处切取0.5cm²左右的小块，用1%次氯酸钠表面消毒3min，再用灭菌水浸洗3次，每次10s~20，用灭菌滤纸吸干水分后移至PDA培养基或2%水琼脂培养基，于21℃～23℃下培养7d。12h日光灯/12h黑暗下无菌培养。注意在显微镜下观察叶片上的分生孢子器特征、分生孢子特征。得到的孢子进行单胞分离纯化。7.2.2种子中病菌的分离吸水纸培养法检查异常的种子，或随机挑取种子，每份样品至少检测400粒种子。用蒸馏水将吸水纸充分湿润（避免产生多余的水），种子均勾地置于吸水纸上（如直径9cm的培养Ⅲ约25粒/皿），加盖后，在20℃～22℃，12h紫外光/12h黑暗下无菌培养。5d～7d后观察培养结果，可疑的菌落进行分离纯化。冷冻培养法按方法处理并播种的种子先在20℃下培养24h，之后于一20℃冷冻24h，最后于20℃～22℃，12h紫外光/12h黑暗