SN_T 3729.11-2014出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第11部分：橘、橙成分检测 PCR-DHPLC法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3729.11—2014出口食品及饮料中常见水果品种的第 11部分：橘、橙成分检测鉴定方法一PCR-DHPLC 法Identification of fruit species in export food and drink-Part 11 : Detection of C.reticulata and C.sinensis ingredient-PCR-DHPLC method2014-08-01实施2014-01-13发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3729.11—2014前言SN/T3729《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法》共分为11个部分：第1部分：草莓成分检测PCR法;第2部分：杏成分检测实时荧光 PCR法；」实时荧光PCR法；第3部分：梨成分检测-第4部分：芒果成分检测实时荧光 PCR法；一一第5部分：木瓜成分检测实时荧光PCR法；第6部分：苹果成分检测实时荧光PCR法；-第7部分：葡萄成分检测PCR法;第8部分：山楂成分检测实时荧光 PCR法；第9部分：桃成分检测实时荧光 PCR法；一第10部分：香蕉成分检测　实时荧光PCR法；一第11部分：橘、橙成分检测PCR-DHPLC法。本部分为 SN/T 3729的第11部分。本部分是按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、吴亚君、韩建勋、黄文胜、王斌、曹际娟、邓婷婷、陈文柄。 SN/T 3729.11—2014出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法　第 11部分：橘、橙成分检测PCR-DHPLC 法 范围1SN/T 3729的本部分规定了日食品和饮料中橘橙成分的实时求光PCR检测方法。本部分适用于果汁、果酱及其他以永果为原辅料的食品中橘橙成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为 1%（重量比）2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其新版本（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T 6682　分析实验室用水规落和试验GB/T27403实验室质量控制美食品y金范3术语、定义和缩略语下列术语和定义适用于本文3.1术语和定义3.1.1橘 Citrus reticulata橘是芸香科柑橘属橘种，为膏绿3.1.2橙(Citrus sinensis橙是芸香科柑橘属橙种，为常绿乔木双子叶植物。3.1.3清汁 Clarified juice经过澄清工艺加工，没有浑浊和沉淀的果汁。3.1.4浊汁 Cloudy juice未经过澄清工艺加工，浑浊但未分层和沉淀的果汁。3.2缩略语3.2.1 DNA:deoxyribonuleic acid,脱氧核糖核酸。3.2.2dNTP:deoxyribonuleoside triphosphate,脱氧核苷酸三磷酸。3.2.3dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。1 SN/T 3729.1120143.2.4 dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。3.2.5 dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。3.2.6dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。3.2.7dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。3.2.8CTAB:cetyltrithylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵。3.2.9Tris:Tris(Hydroxymethyl)aminomethane,三羟甲基氨基甲烷。3.2.101EDTA:Ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。3.2.11Taq:Thermus aquaticus,水生栖热菌。3.2.12OD:optical density,光度密度。4方法提要提取 DNA，以DNA为模版,分别采用橘橙的特异性检测引物进行 PCR扩增，将 PCR 产物经 DH-PLC分析,进行食品及饮料中橘橙成分的检测鉴定，其中以橘橙果肉 DNA为阳性对照，以非橘橙来源的DNA为阴性对照,无菌水作为空白对照。5试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物和探针：见表1。表 1引物和探针序列引物/探针引物/探针序列（5→3）扩增片