SN_T 3729.11-2014出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第11部分:橘、橙成分检测 PCR-DHPLC法.pdf

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3729.11—2014出口食品及饮料中常见水果品种的第 11部分:橘、橙成分检测鉴定方法一PCR-DHPLC 法Identification of fruit species in export food and drink-Part 11 : Detection of C.reticulata and C.sinensis ingredient-PCR-DHPLC method2014-08-01实施2014-01-13发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3729.11—2014前言SN/T3729《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法》共分为11个部分:第1部分:草莓成分检测PCR法;第2部分:杏成分检测实时荧光 PCR法;」实时荧光PCR法;第3部分:梨成分检测-第4部分:芒果成分检测实时荧光 PCR法;一一第5部分:木瓜成分检测实时荧光PCR法;第6部分:苹果成分检测实时荧光PCR法;-第7部分:葡萄成分检测PCR法;第8部分:山楂成分检测实时荧光 PCR法;第9部分:桃成分检测实时荧光 PCR法;一第10部分:香蕉成分检测 实时荧光PCR法;一第11部分:橘、橙成分检测PCR-DHPLC法。本部分为 SN/T 3729的第11部分。本部分是按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本部分主要起草人:陈颖、吴亚君、韩建勋、黄文胜、王斌、曹际娟、邓婷婷、陈文柄。 SN/T 3729.11—2014出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第 11部分:橘、橙成分检测PCR-DHPLC 法 范围1SN/T 3729的本部分规定了日食品和饮料中橘橙成分的实时求光PCR检测方法。本部分适用于果汁、果酱及其他以永果为原辅料的食品中橘橙成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为 1%(重量比)2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的,凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其新版本(包括所有的修改单适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规落和试验GB/T27403实验室质量控制美食品y金范3术语、定义和缩略语下列术语和定义适用于本文3.1术语和定义3.1.1橘 Citrus reticulata橘是芸香科柑橘属橘种,为膏绿3.1.2橙(Citrus sinensis橙是芸香科柑橘属橙种,为常绿乔木双子叶植物。3.1.3清汁 Clarified juice经过澄清工艺加工,没有浑浊和沉淀的果汁。3.1.4浊汁 Cloudy juice未经过澄清工艺加工,浑浊但未分层和沉淀的果汁。3.2缩略语3.2.1 DNA:deoxyribonuleic acid,脱氧核糖核酸。3.2.2dNTP:deoxyribonuleoside triphosphate,脱氧核苷酸三磷酸。3.2.3dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。1 SN/T 3729.1120143.2.4 dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。3.2.5 dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。3.2.6dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。3.2.7dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。3.2.8CTAB:cetyltrithylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵。3.2.9Tris:Tris(Hydroxymethyl)aminomethane,三羟甲基氨基甲烷。3.2.101EDTA:Ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。3.2.11Taq:Thermus aquaticus,水生栖热菌。3.2.12OD:optical density,光度密度。4方法提要提取 DNA,以DNA为模版,分别采用橘橙的特异性检测引物进行 PCR扩增,将 PCR 产物经 DH-PLC分析,进行食品及饮料中橘橙成分的检测鉴定,其中以橘橙果肉 DNA为阳性对照,以非橘橙来源的DNA为阴性对照,无菌水作为空白对照。5试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物和探针:见表1。表 1引物和探针序列引物/探针引物/探针序列(5→3)扩增片

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