SN_T 3767.22-2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第22部分：水稻KF8品系.pdf

S梦n;中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3767.22—2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法第 22 部分：水稻 KF8 品系Loop-mediated isothermal amplification detection method for geneticallymodified components in food for export--Part 22 : Rice KF82014-08-01实施2014-01-13 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3767.22--2014前言SN/T3767《出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法》共分为30部分：第1部分：通用要求和定义；第2部分：筛选方法;第3部分：玉米Bt-11品系；第4部分：玉米Bt176品系；第5部分：玉米GA21品系；第6部分：玉米MIR162品系；第7部分：玉米MIR604品系；第8部分：玉米MON810品系；第9部分：玉米MON863品系；第10部分：玉米MON88017品系；第11部分：玉米MON89034品系；第12部分：玉米T-25品系；第13部分：玉米3272品系；第14部分：玉米59122品系；第15部分：大豆A2704-12品系；第16部分：大豆A5547-127品系；第17部分：大豆DP356043品系；第18部分：大豆GTS40-3-2品系；第19部分：大豆MON89788品系；第20部分：水稻Bt-63品系；第21部分：水稻KF6品系；第22部分：水稻KF8品系；第23部分：水稻KMD品系；第24部分：水稻LLRICE62品系；第25部分：水稻M12品系；第26部分：水稻T1C-19品系；第27部分：水稻T2A-1品系；第28部分：小麦B73-6-1品系；第29部分：甜菜H7-1品系；第30部分：油菜RT-73品系。本部分为SN/T3767的第22部分。本部分按照GB/T1.1一-2009给出的规则起草，请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、邓婷婷、黄文胜、吴亚君、李新实、傅凯、韩建勋、王斌、胡玥、陈文炳、李志勇、 SN/T 3767.22—2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法第 22部分：水稻 KF8 品系1范围SN/T3767的本部分规定了稻谷和大米中转基因水稻KF8品系特异性的环介导等温扩增(LAMP)初筛检测方法。本部分适用于稻谷和大米中转基因水稻KF8品系特异性的定性检测。本方法的定性检测低限为0.5%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的弓引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2　转基因产品检测实验室技术要求GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法SN/T3767.2一2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法　第2部分：筛选方法3防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T19495.2的规定。4抽样与制样按照GB/T19495.7的规定执行。5核酸提取纯化按照GB/T19495.3的规定执行。6LAMP检测方法6.1　原理6.1.1一般原理根据转基因水稻KF8 品系外源基因和水稻边界序列设计特异性内、外引物各对（特异性目标序1 SN/T 3767.22—2014列和引物碱基序列参见附录A），特异性识别目标序列上的六个独立区域，并设计一对环引物提高反应效率。在反应缓冲液中脱氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在 Bst 聚合酶的作用下启动循环链置换反应，在特异目标序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环DNA混合物；从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg²+结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加人显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。6.1.2显色液显色原理在LAMP反应体系中加人预先混合的钙黄绿素和锰离子，未发生反应时锰离子与钙黄绿素结合，钙黄绿素的荧光被淬灭，呈现橙色。当扩增反应发生时，扩增过程中产生的焦磷酸根离子可与锰离子结合，形成不可逆的沉淀物，将锰离子从钙黄绿素上释放下来，从而使钙黄绿素恢复荧光，同时体系中的镁离子与钙黄绿素结合，进一步加强钙黄绿素的荧光，可在365nm紫外