NYT 1422-2007乳及乳制品中乳糖的测定酶-比色法.pdf

ICS 67.050X 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1422—2007乳及乳制品中乳糖的测定酶一比色法Determination of lactose in milk and milk productsEnzyme-colorimetric method(IDF79B: 1991, Dried milk, dried ice-mixes processed cheesedetermination of lactose content enzymatic methods, MOD)2007-06-14 发布2007-09-01 实施中华人民共和国农业部5发布 NY/T 1422—2007前言本标准修改采用IDF79B：1991《乳粉、冰淇淋粉和加工干酪中乳糖含量测定一酶法》英文版）。本标准根据IDF79B:1991 重新起草。考虑到我国国情,本标准与该国际标准的主要差异如下：一试剂部分增加酸度调节剂氢氧化钠、硫酸以及酶试剂硫酸铵的配制方法；-增加试样制备一章，包括液体、固液体、固体试样的制备；分析步骤中增加标准曲线的绘制，由试液吸光度测定与标准系列比较定量,不采用国际标准中摩尔吸光系数计算定量；以试剂空白和试液空白扣除干扰组分和葡萄糖本底值,不采用国际标准中吸光度减量计算；免去国际标准中预试验和试验报告章条；-增加附录A,规定酶的技术要求、试验方法及判定规则；编写格式、用语遵照我国标准GB/T 1.1一2000《标准化工作导则　第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T 20001.4一2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》。本标准的附录 A为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国科学院沈阳应用生态研究所农产品安全与环境质量检测中心。本标准主要起草人：王颜红、林桂凤、王世成、张红、杨玉兰、齐伟。1 NY/T 1422—2007乳及乳制品中乳糖的测定‧酶一比色法1 范围本标准规定了乳及乳制品中乳糖含量的酶一比色法测定方法。本标准适用于乳及乳制品中乳糖的测定。本标准试液的检出限为0.5μg/mLc2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理在 β-半乳糖苷酶(β-GLS)催化下,乳糖被酶解为 D-葡萄糖(G)和 D-半乳糖(GL)。已糖激酶(HK)将D-葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖(G6P),同时将三磷酸腺苷（ATP)转化为二磷酸腺苷（ADP)。受6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)催化,6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸(GA6P），同时烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）被还原成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH)。在波长 340 nm 处NADPH的吸光度值与乳糖含量成正比,与标准系列比较定量。Ci2H201(L) + H20 -BCLS-D-C:Hi2O(G) +D-ChHi2O(GL)D-CH2O(G)+ ATP G6P+ ADPG6P+ NADP*+ HO GSDH-GA6P+ NADPH+H*4　 试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂,实验用水应符合GB/T6682的规定。4.131g/L亚铁氰化钾溶液称取 3.55g三水亚铁氰化钾(K4[Fe(CN)]·3H2O)溶于水,稀释至100mL,混匀。4.240g/L硫酸锌溶液称取 7.13g七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)溶于水,稀释至100 mL,混匀。4.32 mol/L硫酸溶液警告一一稀释浓硫酸时应当将硫酸缓慢加入水中，且不断搅动。否则会引起爆炸。用水稀释浓硫酸V1.0+V.0°4.44g/L氢氧化钠溶液称取 0.4g氢氧化钠(NaOH)溶于水,稀释至 100 mL,混匀,置于聚乙烯塑料瓶中。4.5200g/L氢氧化钠溶液称取 20.0 g氢氧化钠(NaOH)溶于水,稀释至 100 mL,混匀,置于聚乙烯塑料瓶中。4.6422g/L硫酸铵溶液称取 42.2g硫酸铵((NH4)2SO4)溶于水,稀释至100 mL,混勺。1 NY/T 1422-20074.7柠檬酸缓冲溶液，pH6.6称取2.8g二水柠檬酸三钠(CH5O/Na3·2H²O),0.042g一水柠檬酸(CHgO·H2O)和0.625 g七水硫酸镁(MgSO4·7H2O),溶于约 40 mL水中,混勾。用2mol/L硫酸溶液(4.3)或4g/L氢氧化钠溶液(4.4)将pH调至6.6±0.1,定容至50mL,混匀后放置0