SN_T 3064.4-2011国境口岸蝇类、蜚蠊携带重要病原体检测方法 第4部分：致泻性大肠杆菌.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3064.4-2011国境口岸蝇类、畵镰携带重要病原体检测方法第4部分：致泻性大肠杆菌Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port-Part 4 : Diarrheagenic Escherichia coli2011-09-09 发布2012-04-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防傅 SN/T 3064.4—2011言前 SN/T3064《国境口岸蝇类、蟹携带重要病原体检测方法》分为11部分：第1部分：通用要求；第2部分：沙门氏菌；第3部分：志贺氏菌；一第 4 部分:致泻性大肠杆菌;----第5部分:普通变形杆菌和奇异变形杆菌;第6部分：霍乱弧菌；-第7部分：副溶血性弧菌；-第8部分：金黄色葡萄球菌；一-第 9 部分:蜡样芽孢杆菌;第10部分.甲型肝炎病毒;第11部分：寄生虫卵（包囊）。本部分为SN/T3064的第4部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：刘培、曲鹏、苏毅、高旗利、关淳、张霞、张海滨。 SN/T 3064.4--2011国境口岸蝇类、畵携带重要病原体检测方法第4部分：致泻性大肠杆菌1 范围SN/T 3064的本部分规定了国境口岸输人性蝇类和蟹携带致泻性大肠杆菌的检测方法、结果判断、结果报告、阳性结果处置及血清学分型。本部分适用于检验检疫机构对输人性蝇类和蟹携带致泻性大肠杆菌的检测和报告。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。WS 271感染性腹泻诊断标准FDA‧细菌分析手册第 4 章：致泻性大肠埃希氏菌（Bacteriological analytical manual一Chapter 4:Diarrheagenic Escheriachia coli,FDA).3术语、定义与缩略语3.1下列术语和定义适用于本文件。3.1.1致泻性大肠埃希氏菌diarrheagenic Escherichia coli可引起人类腹泻的大肠埃希氏菌。3.2下列缩略语适用于本文件。EHEC（enterohemorrhagic E.coli）:肠出血性大肠埃希菌ETEC（enterotoxigenic E.coli）：肠毒素性大肠埃希菌EPEC（enteropathogenic E.coli）：肠致病性大肠埃希菌EIEC（enteroinvasive E.coli）：肠侵袭性大肠埃希菌EAEC（enteroaggregative E.coli）：肠凝集性大肠埃希菌IMViC:包括靛基质试验（indole production）、V-P试验（voges-proskauer test;V-P），甲基红试验(methyl red-reactive compounds)和柠檬酸试验(citrate test)4 个试验LT（heat-labile enterotoxins）:不耐热肠毒素ST（heat-stable enterotoxins）:耐热肠毒素基因elt 基因:不耐热肠毒素基因est 基因:耐热肠毒素基因AA（aggregative adherence):聚集性黏附LA（localized adherence）：局部化黏附。A/E（attaching and effacing）：黏附和脱落损伤I SN/T 3064.4--20114样本检测4.1 i设备和材料滤器:0.45μm。4. 1. 1 细胞培养板：24孔。4. PCR 仪。4.1.4电泳仪。4.1.5乳鼠:1日龄～4日龄。4.1.6豚鼠。4.2培养基和试剂需要的培养基和试剂为蛋白陈磷酸盐肉汤(TR），伊红美蓝琼脂（EMB），麦康凯琼脂（MAC），平板计数琼脂(PCA)，三糖铁琼脂（TSI)，胰蛋白陈肉汤，糖发酵管溴酚蓝肉汤，尿素肉汤，MR-VP肉汤，靛基质试剂，柯塞尔氏柠檬酸盐肉汤，月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤（LST），EHEC增菌肉汤（EEB），亚碲酸盐头孢克山梨醇麦康凯（TC SMAC)琼脂，胰酪陈大豆酵母浸膏琼脂（TSAYE)，MUG-胰酪陈大豆酵母漫浸膏琼脂（MUG-TSA YEY,Honda氏产肉汤Syncase肉汤(SB)，Ham F10 培养，DMEM培养基，胰蛋白陈大豆肉汤（TSB)，氏试剂.VP试剂，甲基红溶液，迈格吉（MGG），具体成分及制备方法见FDA《细菌分析手册第4章：教泻性大肠埃希氏菌》。另外，还需PBS溶液（