SNT 1735-2006进出口贝类产品中麻痹性贝类毒素检验方法 高效液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1735—2006进出口贝类产品中麻痹性贝类毒素检验方法高效液相色谱法Inspection of paralytic shellfish poison in shellfish for import and export-High performance liquid chromatography2006-01-26 发布2006-08-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1735—2006前言本标准的附录 A为资料性附录。本标由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：谢丽琪、欧阳娜、周亚敏、岳振峰、陈沛金、赵琼晖、方晓明、唐毅峰。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1735--2006进出口贝类产品中麻痹性贝类毒素检验方法高效液相色谱法范围1本标准规定了进出口贝类产品中麻痹性贝类毒素检验的抽样、制样和液相色谱检测方法。本标准适用于进出口贝类产品中麻痹性贝类毒素的检验。2抽样和制样2. 1 检验批以不超过10 000 件为-检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标识、产地、规格和等级等。2.2抽样数量见表1。表抽样数量批量/件最低抽样数/件冷冻品活品,盐藏品3150 及以下90及以下5151~3 20091~500133 201~1 000501~1 200!1 201 ~10 000202.3抽样方法按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。从每件中抽取500g为原始样品，原始样品总量不少于4kg，放人清洁容器内，加封后，标明标记及时送交实验室。-2.4样品的制备从抽取的原始样品中取可食用部分，用清水冲去污物和泥沙，用滤纸或者干净纱布小心地吸去多余的水分，放人搅碎机中搅碎至匀浆状，均分成两份，装人清洁的容器内，作为试样。密封，并标明标记。2.5试样保存将试样于一18℃以下避光保存。注：在抽样和制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3测定方法3.1方法提要试样中的麻痹性贝类毒素用0.1mol/L的盐酸提取，离心后，将上清液过C1g固相萃取柱净化，再经过10000D的超滤离心管过滤，滤液用高效液相色谱进行分离，经在线柱后衍生反应后，进行荧光检测，外标法定量。3.2 试剂和材料除特殊规定外，所用的试剂均为分析纯，水为去离子水。3.2.1乙腈：色谱纯。1 SN/T 1735--20063.2.2100mmol/L庚烷磺酸钠溶液。3.2.36%（体积分数)氨水。3.2.4 500 mmol/L磷酸。3.2.5250 mmol/l.磷酸氢二钾溶液。mol/L氢氧化钾溶液。3.2.7500 mmol/L高碘酸。3.2.8 1.0 mol/L 乙酸。3.2.9 0.01 mol/L.乙酸。mol/L氢氧化钠溶液。3.2. 11标准品:麻痹性贝类毒素(PSP):GTX1,4、GTX2,3、dcGTX2,3、B1(GTX5)、neoSTX、STX、dcSTX标准溶液。3.2.12标准储备液：将标准溶液用相应的介质溶液稀释成一定浓度的标准储备液，避光保存于一20℃以下,可保存1年。3.2.13混合标准溶液：分别准确吸取适量各标准储备液，用0.01mo1/L乙酸配成所需浓度的混合标准溶液。3.3仪器和设备3.3.1高效液相色谱仪，配有荧光检测器，柱后衍生反应装置。3.3.2离心机，5 000 1/min。3.3.3固相萃取装置。3.3. 4 Cig固相萃取柱:Sep-Pak Vac C18,3 mL。3.3.510 000 D的超滤离心管。3.3.6溶剂过滤器和0.45μm过滤膜。3.3.7旋涡振荡器。3.3.8水浴锅。3.4测定步骤3.4.1提取准确称取1g试样(精确至0.01g)于10mL具塞离心管中，加人2mL0.1 mol/L的盐酸溶液，振荡均勾后，用0.1 mol/L氢氧化钠调 pH至 3.0,在调 pH时快速搅拌。将离心管置于100℃的沸水浴中,加热5 min,冷却后，以5000 r/min离心10 min。3.4.2净化将C18固相萃取柱安装在同相萃取装置上，依次用6 mL的甲醇和6mL的水活化,取离心得到的上清液过柱，收集流出液，再用约1mlL的水洗脱，准确收集2.0mL。取约1mL收集液，于10000D的超滤离心管中离心，滤液供液相色谱测定。3.4.3测定液相色谱条件色谱柱:Inertsil C8-3(250 mm×4.6 mm,5 μm),或与之相当。a）b）色谱柱温度：30℃。c）流动相：流动相A：3.0 mmol/I.庚烷磺酸钠+8.5 mmol/I.磷酸铵，pH=7.2：量取15 ml10