NY 568-2002肠病毒性脑脊髓炎诊断技术.pdf

ICS_11. 220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 568--2002肠病毒性脑脊髓炎诊断技术Diagnostic techniques for enterovirus encephalomyelitis2002~08-27 发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布 中华人民共和国农业行业标准肠病毒性脑脊髓炎诊断技术NY/T 568—2002中国标出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷广印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售*开本880×12301/16　印张1/2　字数12千字2002年12月第一版　2002年12月第一次印刷印数 1-1 500 NY/T 568—2002前言本病属于细小核糖核酸病毒科的肠道病毒属肠道病毒 I型（简称PEV）。病毒主要感染动物的中枢神经系统并繁殖，使运动神经节细胞变性，导致非化脓性脑脊髓炎。此病多见于哺乳仔猪和断奶仔猪，成年猪多为隐性感染，引起发烧、厌食、共济失调、四肢麻痹和痉李，该病的发病率和死亡率都很高，造成严重的经济损失。肠病毒性脑脊髓炎（Enterovirus encephalomyelitis），曾称做捷申/塔尔凡氏病（Teshen/Talfan dis-ease），是猪的一种严重病毒性传染病，被世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health（英）,Office Intentional des Epizootic（法）,OIE］和我国农业部分别列为 B类和二类动物疫病。本标准是依据OIE《诊断试验和疫苗标推手册》（2000 年版）（Manual of Standards for DiagnosticTests and Vaccines,2000)第 2.6.3章规定的主要技术制定的。两者的主要差异是：一本标准根据本国和国外实践经验规定了使用主要致病原PEV-1型病毒作为抗原，未采用2-13型PEV,未采用酶联免疫吸附(ELISA)技术；-本标准根据本国实践经验将操作程序更加具体化。本标准附录 A、附录 B是规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部动物检疫所。本标准主要起草人：封启民、李昌琳。 NY/T 568—2002肠病毒性脑脊髓炎诊断技术1范围本标雅规定了(猪)肠病毒性脑脊髓炎诊断技术要求。本标准适用于(猪)肠病毒性脑脊髓炎的病原鉴定及流行病学检查,进出口检疫和免疫抗体的检测。2 临床症状检查临床上分为四个型，即急性型、亚急性型、慢性型和温和型，此外还有无症状仅检出抗体的隐性感染，根据临床症状和病理变化(见第3章)可作出怀疑性诊断。该病潜伏期为 2 d～28 d。2.1 急性型病猪首先出现体温升高，多在40.0℃～41.1℃左右或更高，病猪表现为厌食、倦急、呕吐、严重鼻炎、腹泻及行动失调。发病1d～2d后，体温降至正常，出现中枢神经系统症状，如寒战、感觉过敏、抽搐、共济失调、四肢僵直（特别是后肢）、角弓反张和昏迷，接着发生麻痹，病猪呈犬坐姿或于一侧卧地，前肢作划水样，受声响或触摸刺激时，可引起四肢不协调运动，或角弓反张，也可见面部麻痹和失音。病猪发生便秘。传染性脑脊髓炎的病程发展迅猛，瘫痪出现后的 2 d～3 d,就有 80%～95%的病猪可因呼吸中枢麻痹而死亡,有些病猪死于吸人性肺炎,有些病例急性期之后食欲有所恢复，但见消瘦并伴有麻痹症状。2.2 亚急性型病程为 6 d~～8 d,症状与急性型相似,但较轻缓,死亡较少。2.3慢性型多发于成年猪，病程为几周到几个月，特征为沉郁、行动困难，尾部麻痹、前肢瘫痪,其中有20%的病猪因肺炎、褥疮、败血症等原因死亡。2.4温和型毒力较低的毒株引起，症状较轻，发病率和死亡率较低，主要侵害仔猪。病初体温升高，运动失调。这些症状大多在几天内消失，但有些病猪则随后出现兴奋、发抖、平衡失调、运动失调，最后麻痹等症状。3 组织病理学检查组织学诊断采集的样品有大脑、小脑、间脑、延髓和颈腰部脊髓。这些样品用甲醛固定，制成切片，用常规组织学方法染色，显微镜检查可发现血管周围非化浓性淋巴细胞浸润，浸润现象限于灰质部，偶尔波及白质部。间脑和小脑有明显的变化；大脑半球较轻,病的后期神经元细胞变性,并被胶质结缔组织细胞代替；常见非化浓性脑脊髓炎，特别是在小脑部分。4病毒分离及鉴定4.1材料准备4.1.1病料的采集将发病期的猪扑杀，用无菌操作法取脑和脊髓样品，放在pH7.2的磷酸甘油缓冲液(PBS)中(PBS NY/T 568--2002和甘油等量混合），配方见附录A。4.1.2 细胞PKis或 IBRS,猪肾细胞,至生长良好的单层细胞。4.1