SN_T 1961.7-2013出口食品过敏原成分检测 第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.7—2013出口食品过敏原成分检测第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝「成分Detection of allergen components in food for export-Part 7:Real time PCR method for detecting carrot components2013-03-01发布2013-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局0 SN/T 1961.7-2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：-第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR方法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；一第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；-第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；-第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；-第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；-第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第7部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：孙敏、高宏伟、林超、刘彩霞、陈颖、袁飞。A SN/T 1961.7-2013出口食品过敏原成分检测第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分1范围SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原胡萝卜成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原胡萝下成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法=GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原3.2胡萝卜、carrot又称甘苟，是伞形科胡萝卜属二年生草本植物，以肉质根作蔬菜食用，3.3实时荧光 PCRreal time fluorescent PCR是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号导积累实时监测整个PCR进程。3. 4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4　方法提要样品经研磨后,提取 DNA，以 DNA为模板,采用胡萝卜抗冻蛋白基因特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在过敏原胡萝卜成分。5试剂盒和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。所有试1 SN/T 1961.7—2013剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1胡萝卜成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表 1试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC-内参照探针TAMRA胡萝卜5端引物CGACAAGCAAGCTTTACTCCAA胡萝卜3端引物CGTCTGACACCCATGAGTCTGT胡萝卜抗冻蛋白基因胡萝卜探针FAM-TCAAAACAGCCTTGAAAAACCCCACCA-TAMRA5.2 CTAB 提取缓冲液:CTAB 20 g/l.,氯化钠 1.4 mol/L,Tris 0.1 mol/L,Na²EDTA 20 mmol/L,pH 8.0,高压灭菌。使用前加人终浓度为 2%的β-巯基乙醇。5.3CTAB沉淀液:CTAB5 g/L,氯化钠 0.04 mol/L,pH 8.0,高压灭菌。5.