SN_T 4849.2-2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法 实时荧光PCR法 第2部分：树莓.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4849.2—2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的实时荧光PCR法检测方法第2部分：树莓Identification of the ingredients of common small berry fruitsin food and juice for exportReal-time PCR method-Part 2 : Raspberry2018-03-01实施2017-07-21发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4849.2—2017前 創言SN/T4849《出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法‘实时荧光PCR法》系列标准共分为6部分：第1部分：蓝莓；-第2部分：树莓；-第3部分：黑加仑；1一第4部分：桑葚；一第5部分：蔓越莓和蓝莓；第6部分：猕猴桃。本部分为SN/T4849的第2部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院。本部分主要起草人：吴亚君、陈颖、杨艳歌、邓婷婷、黄文胜、刘鸣畅、王斌、张九凯、韩建勋。 SN/T 4849.2-2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法实时荧光PCR法第2部分：树莓1范围SN/T4849的本部分规定了出口食品及饮料中树莓成分的检测方法实时荧光PCR法。本部分适用于鲜果、冷冻果、蜜饯、鲜榨果汁、果肉型果汁、混浊汁、果干、果酱、及其他以树莓为原辅料的食品及饮料中树莓成分的定性检测（清汁及果酒除外），包括红树莓、黄树莓、黑树莓。此部分所规定方法的红树莓最低检出限（LOD)为1%（体积比），黄树莓和黑树莓的最低检出限（LOD)为0.1%（体积比）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403-2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测GB/T 27657—2011树莓3术语和定义、缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1小浆果 small berry fruits浆果是指由一个子房或联合其他花器发育成的柔软多汁的肉质单果，由一个或几个心皮形成。小浆果则泛指果实较小、多汁的一类浆果。3.1.2树莓 raspberry根据GB/T 27657--2011描述，树莓是蔷薇科悬钩子属植物的果实，聚合果，形状有圆头形、圆锥形和半球形等，根据颜色分为红树莓（Rubus idaeus）、黄树莓（Rubus amhocarpus）、黑树莓（Rubus occi-dentalis）、紫树莓(Rubus neglectus)4个种群。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数L SN/T 4849.2—2017dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonuleoside triphosphate)dATP:脱氧腺苷三磷酸(deoxyadenosine triphosphate)dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(deoxyguanosine triphosphate)dTTP:脱氧胸苷三磷酸(deoxythymidine triphosphate)UNG;尿嘧啶 N-糖基化酶(uracil N-glycosylase)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris:三羟甲基氨基甲烷[Tris(Hydroxymethyl)aminomethane}EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylene diaminetetraacetic acid)Taq :水生栖热菌（Thermus aquaticus)OD:光度密度(optical density)4方法提要果实样品直接粉碎离心，果汁样品直接离心，提取沉淀DNA，果干、果酱、蜜饯先用蒸馏水清洗再提取 DNA。以树莓果实为阳性对照,以其他水果 DNA 为阴性对照,无菌水作为空白对照。使用特异性引物探针进行实时荧光PCR扩增，通过实时荧光信号曲线判定是否存在树莓成分。5 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容