SNT 1933.2-2007食品和水中肠球菌检验方法 第2部分：滤膜法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1933.2--2007食品和水中肠球菌检验方法第2部分：滤膜法Detection of Enterococci in food and water-Part 2 : Method for membrane filtration2007-05-23发布2007-12-01实施体03中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1933.2--2007前言SN/T1933《食品和水中肠球菌检验方法》分为两个部分：第1部分：平板计数法和最近似值测定法；第2部分：滤膜法。本部分为SN/T1933的第2部分。本部分的附录 A是资料性附录。..本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局负责起草。本部分主要起草人：郑秋月、曹际娟、王芳、赵昕、于灵、马慧蕊本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1933.2--2007食品和水中肠球菌检验方法第2部分：滤膜法1范围SN/T1933的本部分规定了水和液体饮料中肠球菌检验滤膜法。本部分适用于生活用水、生产加工用水、废水及茶饮料、碳酸饮料等液体饮料中肠球菌的检验2规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T1933的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本部分。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T0330出口食品中微生物学检验通则3方法提要一定数量液体样品或样品稀释液通过滤膜时，细菌被截留在滤膜上。将滤膜置于选择性培养基上培养后，肠球菌菌落呈现特定颜色。经过肠球菌菌落确证实验后，计数并计算滤膜上阳性肠球菌菌落数，即可检验出样品中肠球菌数目。术语、定义和缩略语4SN/T1933.1确立的术语定义和缩略语适用于SN/T1933的本部分。5设备和材料5.1电子天平：感量为0.001g.5.2恒温培养箱：41℃±0.5℃,35℃±0.5℃.45℃C5.3振荡器。5.4移液管:容量 1 mL,10 mL。5.5²培养皿:9X50 mm,直径 90 mm。5.6玻璃、耐高温塑料、陶瓷或不锈钢过滤器。5.7抽滤瓶5.8 真空泵。5.9 滤膜：直径47 mm,微孔径0.45 um±0.02 μm。6培养基和试剂实验用水符合GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法的要求。除另有规定外，试剂为分析纯。6.1mEI琼脂（见第A.1章）。6.2胆汁七叶苷琼脂（BEA琼脂）（见第A.2章）。 SN/T 1933.2—20076.3　脑心浸液肉汤（见第A.3章）。6.4含 6.5%NaCl脑心浸液肉汤（见第A.4章）。6.5脑心浸液琼脂（见第A.5章）。6.6缓冲蛋白陈水（见第 A.6章）。7样品制备7. 1抽样数量及抽样方法抽样数量及抽样方法按SN/T0330进行。7.2　样品的贮存和运送采样后应尽快进行检验，冷冻样品如不能立即进行检验，应置于一18℃保存。应冷藏保存的待检样品在运送实验室过程中应于1℃～4℃保存。样品采集后8h之内要完成检验7.3　制样7.3.1污染程度低的水及液体饮料可以直接进行检验。7.3.2污染严重的水及液体饮料可吸取25mL样品，加人225mL缓冲蛋白陈水中，充分混匀，制成1：10样品匀液。7.3.3以上样品制备可根据样品污染程度及检验需要，进一步制成10倍递增的样品稀释液。8检验程序水和液体饮料中肠球菌滤膜法检验程序见图1。样品原液或适当倍数稀释液样品过滤mEI琼脂41℃±0.5℃24h±1取带蓝色晕轮的菌落进行确证实验革兰氏阳性|BEA平板生长，在BHIB中6. 5%NaC1的BHIB中球菌水解七叶苷45℃生长35℃生长肠球菌阳性菌落计数及计算报告结果图1食品和水中肠球菌滤膜法的检验程序示意图2 SN/T 1933.2--20079检验步骤与计数9.1培养基平板制备制备 mEI琼脂培养基（见第 A.1章）。9.2样品量的选择根据样品污染情况，选择适宜稀释度的样液。样品加样量在1mL～100mL之间按半对数间距选择（例如：加样100 mIL、30 ml、10mL、3mL），以能在滤膜上生长出20个～60个菌落为宜。每个样品至少选择三个加样量进行过滤。9.3样品过滤将灭过菌的过滤装置连接到抽滤瓶上，用无菌镊子夹取滤膜，将滤膜放至滤器底部。无菌吸取样液至滤器内，打开真空泵进行抽滤。当全部样液通过滤膜后，用20mL～30mL灭菌生理盐水轻洗滤器边缘至少两次。关闭真空泵，打开滤器，用无菌镊子移取滤膜。9.4接种与培养将已滤过样液的滤膜紧贴在mEI琼脂表面上，防止滤膜与琼脂间产生气