SN_T 3767.15-2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第15部分：大豆A2704-12品系.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3767.15--2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法第15部分：大豆A2704-12品系Loop-mediated isothermal amplification detection method for geneticallymodified components in food for export-Part 15 :Soybean A2704-122014-08-01实施2014-01-13 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3767.15--2014前言SN/T3767《出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法》共分为30部分：第1部分：通用要求和定义;第2部分：筛选方法；第3部分：玉米Bt-11品系；第4部分：玉米Bt176品系；第5部分：玉米GA21品系；第6部分：玉米MIR162品系；第7部分：玉米MIR604品系；第8部分：玉米MON810品系；第9部分：玉米MON863品系；第10部分：玉米MON88017品系；第11部分：玉米MON89034品系；第12部分：玉米 T-25品系；第13部分：玉米3272品系；第14部分：玉米59122品系；第15部分：大豆A2704-12品系；第16部分：大豆A5547-127品系；第17部分：大豆DP356043品系；第18部分：大豆GTS40-3-2品系；第19部分：大豆MON89788品系；第20部分：水稻Bt-63品系；第21部分：水稻KF6品系；第22部分：水稻KF8品系；第23部分：水稻KMD品系；第24部分：水稻LLRICE62品系；第25部分：水稻M12品系；第26部分：水稻T1C-19品系；第27部分：水稻T2A-1品系；第28部分：小麦B73-6-1品系；第29部分：甜菜H7-1品系；第30部分：油菜 RT-73品系。本部分为SN/T3767的第15部分。本部分按照GB/T 1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、广州迪澳生物科技有限公司。本部分主要起草人：邵碧英、陈文炳、高东微、李志勇、常彦磊、凌莉、刘津、郑晶、陈彬、缪婷玉、彭娟。1 SN/T 3767.15--2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法第 15部分：大豆A2704-12品系1范围SN/T3767的本部分规定了大豆及其制品中转基因大豆A2704-12品系特异性的环介导等温扩增(LAMP)初筛检测方法。性的定性检测。本部分适用于大豆及其制品本方法的定性检测低限为0.2规范性引用文件T凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文下列文件对于本文件的应用是必不包括所有的修改单)适用于本文件。件。凡是不注日期的引用文件,其GB/T6682　分析实验室用水莉鑫GB/T 19495.2转基因产品检测GB/T 19495.3转基因产品检测核酸2GB/T19495.7转基因产品检测　抽样和制样方法SN/T 2668转基因植物品系特异性检测方法扩增（LAMP)检测方法　第 2部分:筛专基因成分SN/T 3767.2—2014出口食品选方法共衍生品种定性PCR方法（农业部耐除草剂转基因植物及其产品成分检测1485号公告-7-2010）3防污染措施的规定。环介导等温扩增检测过程的GB/4抽样与制样按照GB/T19495.7的规定执行。5核酸提取纯化按照GB/T19495.3的规定执行。6LAMP检测方法6.1原理6.1.1一般原理根据转基因大豆A2704-12品系外源基因和大豆边界序列设计特异性内引物、外引物和环引物各1 SN/T 3767.15—2014一对,特异性目标序列和引物碱基序列参见附录 A。引物特异性识别目标序列上的六个独立区域,利用Bst DNA聚合酶启动循环链置换反应，在大豆A2704-12品系特异目标序列启动互补链合成，在同链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物；从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg²+结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加人显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。6.1.2显色液显色原理SYBR Green I是一种高灵敏的 DNA荧光染料，可以嵌人方式结合到双链 DNA的小沟内。当它与双链DNA结合时，荧光信号是游离状态的800～1000倍。在不发生扩增反应时，SYBR染料分子的荧光信号不发生改变，颜色显现为橙色；当发生扩增反应时，随着双链DNA的增加，SYBR染料的荧光信号也随之大幅度增强，