WS 242-2004职业接触三硝基甲苯的生物限值.pdf

ICS 13. 100C 52WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 2422004职业接触三硝基甲苯的生物限值Biological limit value for occupational exposure to trinitrotoluene2004-04-07发布2004-10-01 实施中华人民共和国卫生部发布 WS/T 242—2004前言本标准是根据流行病学调查和现场劳动卫生调查资料，并参考国内三硝基甲苯研究文献和项目研究结果提出的。本标准的附录 A是规范性附录,附录 B是资料性附录。本标准由中华人民共和国卫生部卫生法规与监督司提出。本标准由中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所和辽宁辽阳153医院共同负责起草。本标雅主要起草人：郑玉新、刘玉瑛、王雅文、王强、庞朝强本标准由卫生部委托技术归口单位中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所负责解释。 WS/T 242—2004职业接触三硝基甲苯的生物限值1 范围1.1本标准规定了职业接触三硝基甲苯化合物的生物监测指标、生物限值及监测检验方法。1.2本标准适用于职业接触三硝基甲苯劳动者的生物监测。2生物监测指标和接触限值生物监测指标和接触限值见表1。表 1生物监测指标职业接触生物限值采样时间血中 4-氨基-2,6 二硝基甲苯-血红蛋白加合物200 ng/g Hb接触4个月后任意时间监测检验方法血中 4-氨基-2,6 二硝基甲苯-血红蛋白加合物的监测检验按附录 A执行。 WS/T 242--2004附录A(规范性附录)血中 4-氨基-2,6 二硝基甲苯-血红蛋白加合物的竞争抑制性酶联免疫测定法A.1 原理4-氨氮基-2,6 二硝基甲苯(4A)是 TNT在体内的主要代谢产物之一,在体内可与血红蛋白共价结合形成4A-血红蛋白加合物（4A-Hb）。本实验利用抗原-抗体的竞争性抑制反应检测半抗原（4A-Hb）。将4A-Hb和一定量的等体积单克隆抗体(McAb)按照顺序加人到已经包被有检测抗原的（4A-BSA)酶联免疫测试板上，4A-Hb与包被的4A-BSA对抗体产生竞争性结合反应。洗去未结合的抗体后，用酶标二抗与包被抗原的抗体相结合，再显色测定吸光度。吸光度与结合到酶标板上抗体的量成正比例关系，与4A-Hb的量呈反比例关系。A.2 仪器A.2.1酶联免疫检测仪，490 nm波长。A.2.2 离心机。A.3 试剂A.3.1包被缓冲液:0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)。A.3.2底物缓冲液:柠檬酸-磷酸盐缓冲液（pH5.0)。底物后应滴,将邻荣一胺(NPN)5 mg溶解在 10 ml.底物缓冲滴中。临用前加入 15 μL体积分A2 3A.3.5辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体HRP-IgG。A.3.64A-Hb单克隆抗体。A.3.7稀释液：含5%小牛血清的0.01mol/L PBS缓冲液。A.3.8 4A-BSA 溶液。A.3.9酶标板洗涤液：含0.1%吐温-20的0.01mol/L PBS(pH7.4）。A.4#样品采集、运输和保存采集静脉血1.0mL,注人经肝素处理的试管中，混匀。A.5 分析步骤A.5.1样品处理将样品离心（800g，5min)，将血浆吸出，向红细胞中加3mL生理盐水于红细胞中混匀，离心(800g，5min)弃去上清液，反复洗涤3次。冰冻过夜，融化后剧烈振荡5min，使红细胞破裂释放出血红蛋白，1000g离心5min，所得上清液即为待测样品。A.5.2样品测定与标准曲线的绘制：a）将 BSA用包被缓冲液稀释成2 μg/mL后，在酶标板上每孔加人100 μL，4℃过夜。b)每孔先加人50uL待测样品，再加人等体积的1：10000的4A-Hb单克隆抗体，37℃保温1.5h后，用酶标板洗涤液冲洗4次，在纸上拍干水滴。每孔加人RP-SAMG100μL，37℃保温1h，冲洗4次，拍干后加人底物反应液100μL，37℃保c）2 WS/T 242—2004温 15 min。d）每孔加人50μL2mol/L的硫酸(H,SO.）中止反应，用ELISA仪测定490 nm吸光度值。e)每块酶标板需要分别制作标准曲线，除了以不同浓度4A标准液代替样品外，其他所有操作步骤与样品一致。f）计算以标准液浓度及其对应的吸光度百分值绘制标准曲线，根据每块酶标板的标准曲线计算出样品浓度。4A-Hb加合物浓度以每克血红蛋白中含4A量表示。A.6说明A.6.1 本方法的最低检出浓度为 100 ng/g Hb,测定范围为 100 ng/g～2 000 ng/g Hb。A.6.2回收率：加标量为5，25,50,100,250,500ng/mL时，回收率分别为101%，102%，103%，82%，99%,91% .A.6.3样品保存时间：4℃冰箱保存10d,浓度下降2.6%。 WS/T 242200