SN_T 4624.4-2016入境环保用微生物菌剂检测方法 第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4624.4—2016入境环保用微生物菌剂检测方法第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌Methods for examination of import microbial blends in the environmentalprotection-Part 4 :Acidithiobacillus ferrooxidans2016-08-23发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4624.4--2016前 創言SN/T4624《人境环保用微生物菌剂检测方法》共分为17部分：第1部分：地衣芽孢杆菌；第2部分：短小芽孢杆菌；--第3部分：巨大芽孢杆菌;第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌；第5部分：β型溶血性链球菌；第6部分：金黄色葡萄球菌；第7部分：沙门氏菌；-第8部分：志贺氏菌；第9部分：致泻大肠埃希氏菌；第10部分：淡紫拟青霉；I第11部分：雅致小克银汉霉；第12部分：哈茨木霉；一第13部分：黄孢原毛平革菌；第14部分：焦曲霉；第15部分：解淀粉芽孢杆菌；第16部分：类产碱假单胞菌；第17部分：恶臭假单胞菌。本部分为SN/T4624的第4部分。本部分按照GB/T1.1—-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本部分主要起草人：王金玲、李靓、金雁、赵颖、贾琳、李瑶、王芳。T SN/T 4624.4—2016入境环保用微生物菌剂检测方法第 4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌1范围SN/T4624的本部分规定了人境环保用微生物菌剂符合性检验嗜酸氧化亚铁硫杆菌的形态学鉴定、生化鉴定、实时荧光 PCR检测方法。本部分适用于人境环保用微生物菌剂符合性检验嗜酸氧化亚铁硫杆菌的检测和鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3分类地位种名 :Acidithiobacillus ferrooridans分类地位：原核生物界、化能营养原核生物门、细菌纲、硫化细菌科、硫杆菌属。4主要试剂和培养基4.1实验用水：应符合 GB/T 6682中一级水的规格。4.2LEPTOSPIRILLUM液体培养基:见附录 A中 A.1。4.3硫代硫酸钠：见A.2。4.4葡萄糖：见A.3。4.5 蔗糖:见 A.4。4.6 丙三醇:见 A.5。4.7蛋白陈:见 A.6。4.8LEPTOSPIRILLUM+葡萄糖:见 A.7。4.9 LEPTOSPIRILLUM+蛋白陈:见 A.8。4.10磷酸二氢铵：见A.9。4.11硝酸钾：见A.10。4.12pH 1:见 A.11.4.13pH 2:见 A.12.4.14pH 3:见 A.13。4.15TE缓冲液（pH8.0）：见 A.14。4.16TBE:见 A.15。4.17Taq DNA 聚合酶。4.18细菌基因组 DNA 提取试剂盒。 SN/T 4624.4-20164.1950XTAE缓冲液(pH8.5):见 A.16。4.20琼脂糖。4.21溴化乙锭。4.22DNA分子量标记:100 bp DNAladder。5主要仪器和设备5.1电子天平（感量0.01g）。5.2恒温培养箱:30℃±1℃。恒温振荡培养箱：30℃土1℃。5.3恒温水浴锅。5.4台式冷冻离心机（最高转速15000r/min）。5.5实时荧光PCR仪。5.6微量移液器和灭菌吸头：10 μL、20 μl.、200 μL、1000 μL。5.7高压灭菌锅。5.8PCR 超净工作台。5.9电泳仪。5.10核酸/蛋白分析仪。5.11凝胶成像系统。6样品制备以无菌操作取10 g(mL)样品加人到100 mLLEPTOSPIRILLUM液体培养基中混匀，在30℃士1℃、150r/min条件下培养4d，直至锥形瓶中颜色变成红棕色。，形态学鉴定7革兰氏染色：取6中的菌液10mL加到无菌离心管中，10000r/min离心10min,弃净上清，取沉淀做涂片进行革兰氏染色，镜检。菌体呈杆状，为革兰氏阴性。8生化鉴定用1.5mL无菌水悬浮 7.1中沉淀,取悬浮水溶液进行生化鉴定，每管100μL。在 30℃士1℃、150r/min 条件下除硝酸钾培养5d外其余均培养3d，反应结果见表1。表1嗜酸氧化亚铁硫杆菌生化特征鉴定项目嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫代硫酸钠葡萄糖蔗糖丙三醇2 SN/T 4624.4---2016表1 (续)鉴定项目嗜酸氧化亚铁硫杆菌蛋白陈LEPTOSPIRILLUM+葡萄糖XLEPTOSPIRILLUM+蛋白陈++硝酸钾磷酸二氢铵+pH