SN_T 2757-2011植物线虫检测规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2757-2011植物线虫检测规范Rules for detection of plant parasitic nematodes2011-07-01实施2011-02-25 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局7966315BB# SN/T 2757—2011前 言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准参加起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李俊环、江丽辉、顾建锋、彭金火、姜莉、姜丽、王有福、汪万春、付海滨、侯浩、闫超杰。1 SN/T 2757-2011植物线虫检测规范1范围本标准规定了进出境植物线虫的检测规范。本标准适用于进出境植物及植物产品、媒介昆虫、土壤及栽培介质中线虫的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T27402实验室质量控制规范植物检疫SN/T1724进境针叶树原木、木制品和木质包装材料中松材线虫的检疫操作规程SN/T 1848植物有害生物鉴定规范3原理利用线虫趋水性和重力作用、浮力作用，将线虫从寄主植物、土壤或栽培介质、包装材料等中分离出来，根据形态特征,结合生物学、分子生物学等方法，判定其种类。4仪器用具和试剂4.1仪器生物显微镜（100×～1000×）、体视显微镜（10×～80×）、培养箱、低速离心机（1000 r/min～5.000 r/min）、超净工作台、水浴锅、恒温箱、控温电热平板、胞囊漂浮器、冰箱。4.2用具木工锯或电锯、斧头、解刀、解剖针、剪刀、镊子、分离筛（10目～20目、60目～100 目、325目～400目、500目）、研钵、线虫滤纸、纱布、漏斗、浅盘、改进贝曼漏斗、乳胶管、夹子、吸管、烧杯、三角瓶、蒸发皿或培养皿、载玻片、盖玻片、凹玻片、酒精灯、试管、指形管、打孔器、干燥器、记号笔、毛刷、毛笔、玻璃纤维丝、自制线虫挑针。4.3试剂40%甲醛、三乙醇胺、甘油、冰乙酸、蔗糖溶液（484 g蔗糖：1L蒸馏水）、高岭土、石蜡、凡土林、乙醇（浓度70%、95%、100%）、苦味酸、中性树胶、指甲油、阿拉伯树胶、丁香油、45%乳酸、40%过氧化氢、马铃薯葡萄糖琼脂、水琼脂。5实验室检测5.1样品的前处理5.1.1植物组织将植物材料（根、茎、果实等)切成小段或薄片（厚度0.5cm），或将种子等较小的植物组织碾碎，1 SN/T 2757—2011待测。5.1.2　土壤及栽培介质将从植物材料和运输工具上收集到的土壤或栽培介质混匀，作为待测样品。5.1.3媒介昆虫将媒介昆虫的整体或部分虫体放人小钵中研碎，加水浸泡后直接在体视显微镜下检测。5.1.4原木、木制品和木质包装材料将原木、木制品和木质包装材料制成小木条或木片(厚度05~cm)作为待测样品。具体可参照SN/T 1724.5.2线虫分离线虫分离方法参见附录A。根据抽取的样品类别、数量或质量，可能携带的线虫种类，选取附录A中一种合适的分离方法进行分离。为提高检出率，各种分离方法可以结合使用。5.3线虫标本制作分离获得的线虫，根据具体情况，可以制作临时玻片或永久玻片来进行线虫的鉴定。一般情况下，为快速鉴定线虫，常制作临时玻片进行观察；如需进一步观察、鉴定或检出的重要线虫种类需要长期保存时，则需要制成永久玻片。线虫玻片标本的制作方法参见附录、B。5.4线虫培养当分离到的线虫数量较少或伪幼虫时，需要根据线虫种类，采用不同的培养方法培养，获得大量雌虫和雄虫，再进一步进行种类的鉴定。线虫培养方法见附录C。5.5线虫的鉴定5.5.1 形态学鉴定线虫的形态学鉴定主要依据雌虫和雄虫的形态特征，如：线虫侧尾腺的有无，雌虫和雄虫的头部和口针的形状、食道类型、尾部形状、生殖系统的形态差异等进行鉴定。针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，同时在每张图片上加相应标尺。线虫的体长、体宽及虫体各个体段的长度及其比例等也是线虫鉴定的参考依据。本标准采用De Man公式,对线虫进行测计。同一性别、同一龄期的线虫个体需测量20 条以上，不足 20 条的全部测量。5.5.2其他鉴定方法采用生物学、分子生物学等方法，结合传统形态学，准确、快速鉴定线虫种类。6结果判定及复核以形态学鉴定为主，辅以其他分类鉴定方法，判定线虫种类。对于检疫性线虫，需要按照GB/T27402和SN/T1848的要求进行复核，复核时需提供雌虫和雄虫标本、玻片标本、图像或影像资2 SN/T 2757—2011料等。7记录按照GB