SN_T 1088-2010布氏杆菌检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1088—2010代替SN/T1088—2002,SN/T1089—2002,SN/T1090—2002SN/T1394—2004,SN/T1525—2005布氏杆菌检疫技术规范Quarantine Frotocol for Brucellosis2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国OR发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T1088—2010目次前言范围12规范性引用文件概述3临床症状与病理变化45病原鉴定5. 1显微镜检查5. 2.细菌培养5.3聚合酶链反应(PCR):6血清学检验6.1虎红平板凝集试验6.2缓冲平板凝集试验t6.3试管凝集试验6.4补体结合试验6.516酶联免疫吸附试验176.6荧光偏振试验·186.7全乳环状试验187综合判定19概述附录A（资料性附录）20附录B（资料性附录)临床症状与病理变化21试剂的配制附录C（规范性附录）25附录D（资料性附录)国际凝集单位26溶血素效价的测定附录E（资料性附录）27补体效价的计算附录F（资料性附录）28抗原效价的测定附录G（资料性附录）29附录H（资料性附录）国际补体结合单位·30溶血素效价的确定附录I（资料性附录）31补体效价的确定附录J（资料性附录）32附录K（规范性附录）抗原效价的测定表33标准溶血孔的配制附录L（规范性附录）34附录M（资料性附录）间接酶联免疫吸附试验37附录N（资料性附录）竞争酶联免疫吸附试验 SN/T1088—2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1088—2002《布氏杆菌病平板凝集试验操作规程》、SN/T1090—2002《布氏杆菌病试管凝集试验操作规程》、SN/T1089一2002《布氏杆菌病补体结合试验操作规程》、SN/T1394-2004《布氏杆菌病全乳环状试验方法》、SN/T1525一2005《布氏杆菌病微量补体结合试验方法》。本标准除编辑性修改外，主要技术变化如下：增加了布氏杆菌显微镜检查；增加了细菌培养；增加了聚合酶链反应；增加了缓冲平板凝集试验；增加了酶联免疫吸附试验；增加了荧光偏振试验。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王玉玲、刘培、朱世强、侯艳梅、栾慎顺。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T1088—2002;SN/T1090—2002;SN/T1089—2002;SN/T1394—2004;SN/T1525—2005。 SN/T1088—2010布氏杆菌检疫技术规范1范围本标准规定了布氏杆菌显微镜检查、细菌培养、聚合酶链反应、虎红平板凝集试验、缓冲平板凝集试验、试管凝集试验、补体结合试验、酶联免疫吸附试验、荧光偏振试验、全乳环状试验等技术要求。本标准适用于牛种、猪种布氏杆菌病的检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1942.1进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法第1部分：分离与记数方法3概述参见附录A。4临床症状与病理变化参见附录B。5病原鉴定5.1显微镜检查5.1.1试剂结晶紫染色液、革兰氏碘液、沙黄复染液、石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美蓝染色液，配制方法见附录C。5.1.2主要设备显微镜。5.1.3试验程序米样品采集取适量待检组织或液体样品，盛于小瓶中送检。样品处理取适量待检样加蒸馏水混匀，用4层纱布过滤，将滤液5000r/min离心5min，用沉淀涂片；也可1 SN/T1088—2010将液体样品直接涂片。革兰氏染色将涂片在酒精灯火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10S。水洗，滴加沙黄复染液，复染1min。水洗，风干，镜检。姜-尼氏染色将涂片在酒精灯火焰上固定，以其背面在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热，但不能太热，以不烫手背为度进行固定。将涂片放在染色架上，滴满石炭酸复红液，用酒精灯在玻片下加热5min，以冒蒸气而不沸腾为度，稍冷，倾去染色液。加3%盐酸酒精脱色至玻片无红色，约为30s～60S。水洗，滴加碱性美蓝液，染色2min。水洗，风干，镜检。结果判定布氏杆菌革兰氏染色菌体染成红色，为革兰氏阴性菌，一般不发生两级着染。布氏杆菌姜-尼氏染色菌体染成红色，背景为蓝色。若发现革兰氏染色阴性、姜-尼氏染色为红色的球状杆菌或短小杆菌，可作出疑似布氏杆菌阳性诊断，否则