SN_T 4543.1-2016商品化试剂盒检测方法 泰乐菌素 方法一.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4543.1--2016代替 SN/T 2060—2008商品化试剂盒检测方法泰乐菌素方法一Commercial kit method-Tylosin-Test method I2016-08-23 发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局电话！、刮涂层查真伪” SN/T 4543.1—2016前言本部分为SN/T4543中第1部分。本部分按照GB/T.1.1-2009给出的规则起草，本部分代替了SN/T2060-2008《出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法》。本部分与SN/T2060-2008主要技术变化如下：标准名称由《出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法》改为《商品化试剂盒检测方法‧泰乐菌素‧方法》。附录中增加了试剂盒的评估结果。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、浙江迪恩科技有限公司产品。本部分主要起草人：帅江冰、张晓峰、吴姗、邵宏宏、李可、王子。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 2060--2008。 SN/T 4543.1—2016商品化试剂盒检测方法泰乐菌素方法一1范围SN/T4542的本部分规定了蜂王浆和王浆粉中泰乐菌素残留量的酶联免疫测定方法。本部分适用于蜂王浆和王浆粉中泰乐菌素残留量的筛选测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法3方法提要本部分以酸性的庚烷磺酸钠缓冲液来提取蜂王浆中残留的泰乐菌素，沉淀王浆中蛋白后并调节pH至7.0处理后，样品中残留的泰乐菌素与酶标记泰乐菌素共同竞争结合至包被在微孔板上的绵羊抗兔抗体，通过洗涤除去未结合的泰乐菌素和酶标记泰乐菌素，然后加人底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中泰乐菌素的含量。4试剂和材料除注明外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。4.1泰乐菌素检测试剂盒。本试剂盒按照SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会评价。具体评价参见附录 A。试剂盒组成如下：预包被抗体的96孔板：12条×8孔。a)b）泰乐菌素标准溶液:0 ng/mL、0.2 ng/mL、0.625 ng/mL、2.5 ng/mL、10.5 ng/mL、50 ng/mL。c)泰乐菌素酶标记物溶解液。泰乐菌素酶标记物冻干粉：根据泰乐菌素试剂盒中说明，可用泰乐菌素酶标记物溶解液配制成d)泰乐菌素酶标记物溶液。e)显色剂。f)样品稀释液：根据泰乐菌素试剂盒中说明，可用蒸馏水10倍稀释后使用。浓缩清洗液（10倍浓缩）：可用水稀释后使用。g）h）反应终止液。试剂盒应在2℃～8℃避光条件下保存。 SN/T 4543.1—20164.2磷酸钠(Na:PO·12H²O)。4.3庚烷磺酸钠[CH（CH²)。SO:Na]。4.4磷酸。4.5磷酸氢钠(NazHPO；·12H²O)。4.6甲醇。4.7庚烷磺酸钠缓冲液：称取11.4g磷酸钠（4.2)和10.1g庚烷磺酸钠（4:3），用蒸馏水定容到1L，用磷酸调节 pH至 2.0。4.8磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢钠（4.5)34g，用蒸馏水定容到1L，调节pH至8.0。4.9泰乐菌素标准物质：纯度≥98%。4.10泰乐菌素标准品溶液的配制：用甲醇（4.6)作为溶剂配制成400μg/mL的储存液，于-20℃条件下保存。5仪器和设备5.1酶标仪。5.2八道移液器：10 μL～100 μL。5.3单道移液器:10 μL～100 μL,100 μL～1 000 μL 和 2 mL～10 mL。5.4混合振荡器。5.5高速低温离心机：6000 r/min。5.6具塞试管:50 mL。5.7电子天平：0.01g～100g。5.8酸度计：精确到0.1。6试样的制备与保存6.1i试样的制备原始样品总量不得少于200g，蜂王浆充分搅拌均匀后，将样品分成两等份；冻干粉采用四分法，将样品分成两等份。分好的样品装人洁净容器，加封并做标识。6.2试样的保存将样品于20℃～18℃条件下保存。7分析步骤7.1i试样的提取称取2.0g蜂王浆样品，置于 50 mL具塞试管中，加人6 mL（精确到0.1mL)庚烷磺酸钠缓冲液（4.7），充分振荡，15℃下6000r/min离心10min直至清亮，取0.5 mL上清液于干净试管，加人0.5mL磷酸盐缓冲液（4.8），混合均匀；用磷酸（4.4)