SNT 1941.3-2007进出口食品中乳酸菌检验方法 第3部分：乳酸杆菌的PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1941.3—2007进出口食品中乳酸菌检验方法第 3 部分：乳酸杆菌的 PCR 法Detection of lactic acid bacteria in food for import and export-Part 3 :Lactobacillus PCR method2007-08-06发布2008-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1941.3—2007前言SN/T1941《进出口食品中乳酸菌检验方法》分为三个部分：第1部分：分离与计数方法；第2部分：PetrifilmTM测试片法；一第3部分：乳酸杆菌的PCR法。本部分为SN/T1941的第3部分。本部分的附录 A和附录B均为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局本部分主要起草人：吴斌、郑秋月、李叶、胡传伟、李振荣。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1941.3—2007进出口食品中乳酸菌检验方法第 3部分：乳酸杆菌的 PCR法1范围SN/T1941的本部分规定了乳酸杆菌的PCR检验方法。本部分适用于天然或添加乳酸菌的食品及原料中乳酸菌的测定。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/1941的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本部分。GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1941.1进出口食品中乳酸菌检验方法第1部分：分离与计数方法WS/T 230—2002　临床诊断中聚合酶反应技术的应用3生物安全措施为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测乳酸杆菌，所有培养物和废弃物应小心处置。并按照GB19489中的有关规定进行。4防污染措施参照WS/T230-2002中第6章进污染的预防和控制5术语、定义和缩略语5.1 术语和定义下列术语和定义适用于 SNXT1941的本部分5.1.1乳酸杆菌属‧Lactobacillus乳酸杆菌为一类革兰氏阳性无芽孢的细长杆菌，能分解葡萄糖或乳糖产生污染的乳酸，专性厌氧、兼性厌氧或厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性。5.1.2聚合酶链反应polymerase chain reaction,PCR用两段(通常长度为 15个～25 个核苷酸)寡脱氧核苷酸作为反应的引物，与待测模板 DNA链上的特定位点分别发生互补。在适宜反应液中 DNA聚合酶的催化下,通过 DNA变性、退火及延伸数十个循环而获得两个互补位点之间 DNA片段的大量拷贝。反应液包括含有镁离子的反应缓冲液、4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）、模板DNA、引物及热稳定 DNA聚合酶组成。5.1.3引物 primer应用化学方法合成一对与已知待扩增基因片段两侧DNA序列互补的寡核苷酸,作为 PCR 扩增的1 SN/T 1941.3-2007引物。5.2缩略语下列缩略语适用于SN/T1941的本部分。5.2.1 PCR.polymerase chain reaction(PCR,聚合酶链反应）。5.2.2 DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。5.2.3 dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。5.2.4dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。5.2.5 dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。5.2.6 dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。5.2.7 dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。5.2.8dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。5.2.9 UDG:uracil DNA glycosylase,尿嘧啶 DNA-糖基酶。5.2.10 bp:base pair,碱基对。5.2.11 Taq:Thermus aquaticu,水生栖热菌。： 5.2.12、Tris:tris(hydroxymethyl) aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。5.2.13TE:Tris-HCI、EDTA 缓冲液。6培养基和试剂除另有规定外，试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水为灭菌双蒸水。6.1MRS肉汤（见第 A.1章）。6.2MRS琼脂（见第 A.2 章）。6.3改良番茄汁琼脂培养基（改良 TJA 培养基)（见第 A.3章）。6.4改