SNT 1958-2007进出口伏马毒素B1残留量检测方法 酶联免疫吸附法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1958—2007进出口食品中伏马毒素B1残留量检测方法酶联免疫吸附法Screening method of fumonisin B, residues in foodstuff forimport and export--Enzyme linked immunosorbent assay method2008-03-01实施2007-08-06 发布中华人民共和国线8100或发布，数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1958—2007前言本标准附录 A、附录 B和附录 C均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、天津科技大学本标准主要起草人：郑文杰、王硕、张宏伟、姚霞、魏亚东、刘烜、张燕、张骏本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I SN/T 1958--2007进出口食品中伏马毒素B，残留量检测方法酶联免疫吸附法1 范围本标准规定了食品中伏马毒素B,残留量的酶联免疫吸附测定方法本标准适用于玉米、大米、黄米、燕麦、大麦及花生中伏马毒素B残留量的筛选检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本一是不注明目期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3测定方法3.1方法提要用甲醇/水提取样品中伏马毒素B用竞争性酶联免疫吸附法进布检测。3.2试剂和材料除另有要求外，所有试剂均为分析纯水为GB/工.6682-规定的二级水。伏马毒素B酶联免疫吸附测定试剂盒（参见附录Ar3.2.1甲醇。3.2.22H20).磷酸氢二钠（Na²HPO43.2.3磷酸二氢钠(NaH,PO4·H,O)。3.2.4氯化钠。3.2.5：20，体积比）稀释，于使用时配制。掩蔽剂稀释液：掩蔽剂：磷酸盐缓冲液(h3.2.6溶液I：甲醇:掩蔽剂稀释液（110，体积比）。3.2.7伏马毒素B，标准品（英文名称：fumronisinBJCAS代码116355-83-0）：纯度大于等于99.5%。3.2.813.2.9标准品贮备液：配制成10／mg/L甲醇贮备液，-20℃保存，有效期3个月。低温保存试剂，放置于室温不要超过 4h，使用时，各溶液应达到室温。3.3仪器和设备粉碎机。3.3. 13.3.2天平（精确到0.001g）。3.3.3旋涡混合器。3.3.4气浴摇床。3.3.5酶标仪（测定波长 450nm）。3.3.6洗板机。3.3.7单道微量加样器20μL,100μL,200μL。1）伏马毒素B，酶联免疫吸附测定试剂盒是由天津生物芯片技术有限责任公司提供的产品的商品名称。给出这信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1 SN/T 1958—20073.3.8多通道微量加样器：200μL。3.4试样制备取样品约500g混匀，均分成两份，装人洁净容器内作为试样，密封，并标明标记。3.5试样保存将试样于4℃冷藏保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3.6提取将玉米等谷物样品各取25g充分粉碎，从中取样品各5g，加人20mL甲醇/水（3：1，体积比），振荡萃取15min，静置5min，取部分上清液用掩蔽剂稀释15倍后进行ELISA检测。3.7酶联免疫法检测3.7.1标准曲线的制备用溶液I稀释10mg/L的伏马毒素Bi标准溶液储备液至100μg/L，用溶液I对100μg/L的伏马毒素Bi标准溶液进行1：3梯度稀释，得到一系列不同浓度的伏马毒素 B标准溶液（100 μg/L,33. 3 μg/L,11. 1 μg/L,3. 7 μg/L,1. 2 μg/L,0. 4 μg/L)。3.7.2样品测定在酶标板中分别加入100μL不同浓度的伏马毒素 B:标准溶液和样品待测液。在空白和对照孔中分别加人100 μL的水。每个标准溶液、样品待测液、空白和对照孔均做平行。空白孔中加人100 μL磷酸盐缓冲液。除空白孔外,在每个孔中则加入100 μL的酶标记物稀释液。轻拍混匀，用粘胶纸封住微孔以防溶液挥发，室温孵育60 min。弃掉酶标板中的液体，用洗涤液洗板三次。加人混合好的底物液150 μL,轻轻混匀，室温放置30 min 后，每个孔加人50 μL的终止液,轻轻晃动酶标板,10 min内在酶标仪上读出每孔450nm吸光值。3.8空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。3.9结果的计算3.9.1计算抑制率值不同浓度伏马毒素B1对抗原抗体结合反应的抑