NYT 1736-2009微生物肥料菌种鉴定技术规范.pdf

ICS 65.080B 10NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1736—2009微生物肥料菌种鉴定技术规范Technical specification of strain identification for microbial fertilizers2009-05-20实施2009-04-23 发布中华人民共和国农业部发布 NY/ T 1736--2009前言本标准的附录 A 为规范性附录,附录 B、附录 C 和附录 D 为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心、中国农业科学院农业资源与农业区划研究所。本标主要起草人：冯瑞华、李俊、沈德龙、姜昕、李力、杨小红、曹凤明、关大伟、陈慧君一 NY/T 1736—2009微生物肥料菌种鉴定技术规范1范围本标准规定了微生物肥料使用菌种鉴定程序与方法的选用原则。本标准适用于微生物肥料科研、教学、质检和生产等领域中的菌种鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。NY/T 1113-2006微生物肥料术语3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1细菌 bacterium形体微小,结构简单，通常以二分裂方式进行繁殖的单细胞原核生物，基本形态有球状、杆状、弧状和螺旋状。3. 2放线菌actinomycete细胞呈丝状、孢子方式繁殖和高(G十C)mol%的革兰氏阳性细菌。3. 3酵母菌yeast单核的单细胞真菌，以芽殖或裂殖方式行无性生殖，或形成孢子行有性生殖。3. 4丝状真菌 filamentous fungus菌丝体发达，不产生肉眼可见子实体的真菌。3. 5种 species由表型特征相似、遗传性状相近的菌株组成,并与其他类群的菌株存在明显差异。3. 6菌株strain属于同一个种，但来源不同的单细胞或纯培养的后代3.7 pure culture纯培养物由单个细胞繁殖而来的培养物。3.8纯度检测 purity examination检测菌种是否为纯培养物的过程。1 NY/T 1736—20093.9鉴定 identification根据通用的检索系统，对未知微生物菌株进行性状观察和测定,确定该微生物分类地位的过程。4鉴定原则4.1用于鉴定的菌株应为纯培养物。4.2依据所鉴定菌株的类群和特性，选择相应的鉴定检索系统和鉴定方法。4.3鉴定结果应与对应的鉴定检索系统或模式菌株性状进行对比,确定菌株的分类地位。5菌种鉴定常规流程图待鉴定培养物纯度检测遗传特性培养特征与生理生化鉴定菌体形态观察特性鉴定鉴定结果的分析、比较、确认及出具报告6鉴定方法6.1纯度检测6.1.1菌落形态观察在适宜培养基平板上,将待鉴定培养物划线或稀释涂布，经适宜条件下培养后，选取划线或稀释涂布分离得到的单菌落，观察其在同一平板上的大小、形状、颜色、质地、光泽等。6.1.2菌体形态观察挑取待鉴定细菌培养物，涂布于载玻片上无菌水滴中，进行简单染色或革兰氏染色；酵母菌和丝状真菌制成水浸片。显微镜下观察菌体形态。6.1.3纯度确定菌落和菌体形态一致者，确定培养物符合要求。6.2培养特征观察6.2.1细菌菌落特征将待鉴定培养物划线或稀释涂布于营养肉汤培养基(附录 A.1)或其他适宜的细菌培养基平板上，适宜条件下培养2d～5d后，观察和记录幼龄和老龄菌落的大小、形状、质地、边缘、隆起、颜色、光泽、透明度等性状。6.2.2放线菌培养特征将待鉴定培养物点植、划线或稀释涂布于适宜的培养基(附录 A.3～A.7)平板上,28℃培养5d～15d,观察菌落的大小、形状、表面状况、气生菌丝、基内菌丝的颜色及可溶性色素。6.2.3酵母菌培养特征2 NY/T 1736---2009将待鉴定培养物划线或稀释涂布于麦芽汁琼脂(附录 A.9)平板上，25℃～28℃培养3d～7d,观察菌落的大小、形状、质地、隆起、边缘、颜色、光泽等性状。将待鉴定培养物接种于麦芽汁液体培养基中，25℃～28℃培养3d,观察是否形成醛膜、菌环或岛及沉淀。6.2.4丝状真菌培养特征将待鉴定培养物点植或稀释涂布于 PDA培养基(附录 A.11)或察氏培养基(附录 A.8)平板上,25℃～28℃培养2d～14d,观察菌落质地、颜色、生长速度、色素的产生情况、渗出液、菌落背面的颜色等。6.3菌体形态特征观察6.3.1细菌形态特征挑取在适宜培养基上生长的幼龄培养物，涂片、革兰氏染色，显微镜下观察菌体形状、大小、革兰氏染色反应等；观察芽孢的有无、形态和着生位置。