SN 1200-2003烟草中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1200—2003烟草中转基因成分定性PCR检测方法Protocol of qualitative PCR for the detection of geneticallymodified components in tobacco2003-03-17 发布2003-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1200--2003前言本标准的附录A是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：徐自忠、贾建军、周晓黎、旦有民、周力兵。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。11一 SN/T 1200--2003烟草中转基因成分定性PCR检测方法11范围本标准规定了烟草中转基因成分定性PCR检测方法。本标准适用于对新鲜和干的烟叶、种籽及烤烟等的转基因成分进行定性检测和鉴定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注且期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T 1193基因检测实验室技术要求SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。3.1 术语和定义3. 1. 1.转基因 transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过各种导人手段，使其在该物种中进行表达，以便该物种获得新的品种特征。3. 1. 2聚合酶链式反应polymerase chain reaction,简称 PCR模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTPs)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数增加。3.2缩略语3. 2. 1 UNG;uracil DNA glycosylase,尿嘧啶 DNA-糖基酶。3.2.2 EDTA:ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。3.2.3CTAB:十六烷基三乙基溴化铵。3.2.4 TMV-CP:tobacco mosiac virus coat protain,烟草花叶病毒外壳蛋白基因。3.2.5CMV-CP:cucumber mosiac virus coat protain，黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因。3. 2.6TMV-54KD:tobacco mosiac virus 54KD gene,烟草花叶病毒 54KD蛋白基因。3.2.7BT:Bacillus Thuingensis subsp，苏云金杆菌杀虫蛋白基因。3.2.8 PVY-CP:potato virus Y coat protain,马铃薯病毒 Y 外壳蛋白基因。3.2.9 TBE:Tris 碱、硼酸、EDTA 缓冲液。3. 2. 10NPT-II :ncomycin-3-phosphotransferase gene,新霉索-3-磷酸转移酶基因。3.2. 11 NOS:terminator of nopaline synthase gene,胭脂碱含成酶基因终止子。3.2.12 CaMV 35S:35S promoter from cauliflower mosaic virus,来自于花椰菜花叶病的 35S 启1 SN/T 1200—2003动子。3.2.13Tris:tris （hydroxymethyl)aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。3.2. 14 DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。3. 2. 15dNTPs:dTTP.dATP、dCTP,dGTP。3. 2. 16dTTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。3.2.17dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。3.2. 18dCTP:deoxycytidine triphosphate，脱氧胞苷三磷酸。3.2. 19dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。3.2.20dUTP:deoxyuridine triphosphate,