SNT 2178-2008危险品哺乳动物红细胞微核试验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2178-2008危险品哺乳动物红细胞微核试验方法Test method of in vivo mammalian erythrocyte micronucleusfor dangerous goods2008-09-04 发布2009-03-16实施Ox中华人民共和国发布全最获 查询真体国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2178—2008危险品哺乳动物红细胞微核试验方法范围本标准规定了哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的术语和定义、试剂和仪器、试验方法及试验结果。本标准适用于检测危险化学品的致突变作用。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准GB14925实验动物环境及设施卫生部《消毒技术规范》3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1微核micronucleus在细胞的有丝分裂后期，染色体有规律地进人子细胞形成细胞核时，仍然滞留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整条染色体。它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内而形成，因比主核小，故称为微核。3.2微核率 micronucleus cells rate含有微核的嗜多染红细胞数，以干分率（%)表示。3.3着丝粒 centromerm;kinetochore细胞分裂中期染色体上纺锤丝附着的区域，借此子代染色体得以有规律地向子代细胞两极移动。3.4正染红细胞包normochromatic erythrocyte; NCE成熟红细胞，因其核糖体已消失，可通过选择性的染色而与未成熟红细胞区别开来。3. 5嗜多染红细胞polychromatic erythrocyte;PCE未成熟红细胞，是红细胞成熟过程中的一个中间阶段，此时因胞质内仍含有核糖体，可通过选择性的染色而与成熟红细胞区别开来。4试剂和仪器4.1试剂全部试剂除注明外，均为分析纯，试验用水为蒸馏水。4.1.1小牛血清（灭活）：配制方法见《消毒技术规范》。1 SN/T 2178--20084.1.2姬姆萨(Giemsa)染液、Giemsa 应用液：配制方法见《消毒技术规范》。4.1.3磷酸盐缓冲液(pH6.8）：配制方法见《消毒技术规范》。4.1.4甲醇4.2仪器与器材生物显微镜、恒温水浴箱、解剖剪、镊子、止血钳、注射器、灌胃针头、载玻片、塑料吸瓶、乳钵、干净纱布、滤纸等。5试验方法5.1试验动物常规选用初成年的健康小鼠和大鼠。选用体重为25g～30 g的小鼠或体重 150g～200 g的大鼠50只，雌雄各半。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和GB14925有关规定。5.2剂量分组至少设置三个剂量组，每个剂量组10只动物，雌、雄性各半，同时应设阳性对照和阴性对照；高剂量组应达到不产生动物蛇亡的最大毒作用剂量；-般取受试样品1/5、1/10、1/20LDso剂量，以求获得微核的剂量-反应关系曲线；阳性对照物可选用环磷酰胺（cyclophosphamide）、甲磺酸乙脂（ethyl methanesuphonate）、乙基亚硝基脲（ethyl nitrosourea)、丝裂霉素 C(mitomycin C)、三亚乙基密胺（triethylenemel-amine)等,如使用特殊溶剂的,应设溶剂对照。*5.3限度试验如果单次染毒剂量不小于2000ng/kg体重，未出现毒性效应，且根据资料预期受试物无遗传毒性，则不需要进行其他染毒剂量的试验5.4样品处理通常用蒸馏水、生理盐水、植物油、食用淀粉、羧甲基纤维素钠等;溶剂应既不干扰测定物质也不产参考资料说明其成分。生毒性。如使用特殊溶剂或载体，应有5.5 试验步骤5.5.1染毒一般采用灌胃法，也可采用腹腔注射法。单次染毒以适当的间隔采集骨髓样品至少2次，开始木早于染毒后24h,最后不晚于染毒后48h。外周血采样以适当的间隔至少2次，开始不早于染毒后36 h，最后木晚于染毒后72/h。如在一个采样时间发现阳性结果,则不需要进一步的采样。多次染毒每天一次染毒,共 2次或多次(24 h)染毒,可在末次染毒后 18 h～24 h之间采集骨髓 1次，对周围血可在末次染毒后 36 h～48 h之间采样一次。5.5.2处死动物处死动物后，立即从大腿骨或胫骨获得骨髓细胞，从尾静脉或其他适当血管取外周血。5.5.3 制片将骨髓液滴在载玻片一端的小牛血清液滴里，仔细混匀。然后，按血常规涂片法涂片，长度约2 c