WS_T 454-2014从业人员预防性健康检查 沙门菌、志贺菌检验方法.pdf

ICS 13.100C 51wS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 4542014从业人员预防性健康检查沙门菌、志贺菌检验方法Preventive health examination of employees--.Examination of Salmonella and Shigella2014-10-01实施2014-05-08 发布中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布 WS/T 454—2014目次前言1范围2规范性引用文件3定义、术语和缩略语原理45设备和材料6培养基和试剂7检验程序8操作步骤附录A（规范性附录）沙门菌、志贺菌荧光PCR检测反应体系及注意事项附录B（规范性附录）标本混合方案1 WS/T 454--2014前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准起草单位：深圳市疾病预防控制中心、广州市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、河南省疾病预防控制中心、浙江省疾病预防控制中心、广西壮族自治区疾病预防控制中心、上海市疾病预防控制中心等。本标准主要起草人：程锦泉、扈庆华、石晓路、王鸣、阙飙、夏胜利、张政、王鸣柳、陈敏、吴新伟、窦文祥等。I WS/T 454--2014从业人员预防性健康检查沙门菌、志贺菌检验方法1范围本标准规定了粪便标本(肛拭子)中沙门菌和志贺菌的检验方法。本标准适用于公共场所从业人员、食品生产和加工（食品生产）人员、食品流通和餐饮服务（食品经营）人员、饮用水生产、经营人员预防性健康检查项目中，粪便标本(肛拭子)的沙门菌和志贺菌检验。其他相关行业从业人员，如从事医疗卫生用品生产、经营人员以及化妆品生产人员等，预防性健康检查项目中,粪便标本(肛拭子)的沙门菌和志贺菌检验可参照本标准执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB4789.4--2010食品微生物学检验沙门菌检验GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂WS/T 230-2002临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用WS280伤寒和副伤寒诊断标准WS 287细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准3定义、术语和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1从业人员预防性健康检查preventive health examination of employees对公共场所从业人员、从事食品生产和加工（食品生产）人员、食品流通和餐饮服务（食品经营）人员，饮用水生产、经营人员，医疗卫生用品生产、经营人员以及化妆品生产人员等。按国家有关卫生法律、法规规定所进行的从业前、从业期间的健康检查。3.1.2实时荧光 PCR real-time PCR实时荧光聚合酶链反应。3.1.3Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时，所经历的循环数。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid)FAM:6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein)1 WS/T 454--2014HEX:六氯-6-甲基荧光素(Hexachlorofluorescein)LDC:赖氨酸脱羧酶(Lysine Decarboxylase)MAC:麦康凯琼脂(MacConkey Agar)NB:营养肉汤(Nutrient Broth)NP-40:乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P-40)SC:亚硒酸盐胱氨酸(Selenite Cystine)Taq 酶:Taq DNA 聚合酶(Taq DNA polymerase)TSI:三糖铁琼脂(Triple Sugar Iron Agar)UNG 酶:尿嘧啶 DNA 糖基酶(Uracil DNA glycosylase)XLD:木糖-赖氨酸-胆酸盐琼脂(Xylose-Lysine- Desoxycholate)4原理4.1筛查试验依据核酸体外扩增基本原理，针对沙门菌和志贺菌特异靶基因序列设计引物、荧光标记探针，在PCR反应过程中，当荧光信号达到并超过所设定的阈值时，利用荧光信号强度与PCR产物量的正相关关系，即可对PCR结果进行分析和判定。对标本的模板DNA进行实时荧光PCR扩增，根据其Ct值及扩增曲线进行标本结果报告，当PCR结果呈阴性时直接报告阴性结果；当 PCR结果呈阳性时，进一步对阳性标本做确诊实验。从而实现对从业人员健康检查粪便标本中的沙门菌和志贺菌的快速筛查。4.2确诊试验PCR筛查试验结果为阳性时，依据8.5确诊试验进行细菌培养和鉴定，包括生化和血清学鉴定，当确诊试验鉴定结果为阳性时报告阳性，为阴性时报告阴性。5设备和材料