NY 564-2002猪巴氏杆菌病诊断技术.pdf

ICS .11. 220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 564—2002猪巴氏杆菌病诊断技术Diagnostic techniques for swine pasteurellosis2002-08-27 发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 564-2002前言猪巴氏杆菌病，又称猪肺疫，是危害我国养猪业的重要疫病之一，我国将之定为二类动物疫病。世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英),Office Intentional des Epizootic(法),OIE]虽无本病的诊断标准，但对牛和禽的巴氏杆菌病的诊断有技术规定。各国多年研究和实践经验表明，由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引起的多种动物疫病其实验室诊断技术基本上是一致的。本标推是参照OIE有关多杀性巴氏杆菌引起的疫病之诊断技术规定和国内外通用方法，依据我国的实践经验制定的。本标准的附录 A、附录 B、附录 C 是规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国兽医药品监察所。本标准主要起草人：关孚时、毛开荣、钱心元、魏财文、夏业才。 NY/T 564—2002猪巴氏杆菌病诊断技术1范围本标准规定了猪巴氏杆菌病诊断的技术要求。本标准所规定的临床诊断、病理剖检和病原分离鉴定,适用于猪巴氏杆菌病的诊断,间接血凝试验技术和琼脂扩散沉淀试验技术适用于病原血清学分群和定型鉴定。2临床诊断猪巴氏杆菌病分流行性和散发性两类。2.1 流行性特点是病程很短，发病快，体温可高达41C以上。分最急性型和急性型两种。最急性型：多发生在流行初期，呼吸困难，心跳加快，于数小时内死亡。急性型：病状主要分两种，一种表现为咽炎症状，咽喉部皮肤发红、热痛肿胀、坚硬,延伸可达到耳根及颈部。常呈犬坠式伸长头颈呼吸。腹侧、耳根和四肢内侧可发现红色斑点。口、眼等可视粘膜呈暗红色。一-经出现呼吸症状，病情即迅速恶化，口、鼻流出泡沫状分泌物，死亡率达到100%。另一种为急性胸膜炎病状，表现为呼吸困难，痉挛性于咳，触诊胸部有疼痛感，鼻流稠粘液。初便秘后腹泻，病后期皮肤有紫斑或血点。病程约 4 d～6 d。2.2散发性常年都有发生，病程初期体温升高到41℃C左右。呈现呼吸困难，偶尔表现急促腹式呼吸。间有咳嗽。口、鼻和肛门粘膜及四肢皮肤呈暗紫色，颈部无红肿病状，由于病程长，诸多病例逐渐消瘦死亡。3 病理剖检3.1最急性型病理变化不明显，常见皮肤、皮下、浆膜、黏膜有大量出血点。3.2急性型主要表现咽喉部的结缔组织呈出血性浆液性炎。口腔和鼻孔流出红色泡沫状液体。皮下组织有大量出血点，全身淋巴结出血，断面呈红色，颈部淋巴结肿大，有渗出液，全身各脏器浆膜和黏膜及皮肤呈现点状出血，脾不肿大。3.3散发性颈部不肿胀，喉头充血、出血，气管有大量泡沫，肺脏呈现水肿、气肿、充血、出血，纤维素性胸膜肺炎病变，局部出现红色和灰色肝变，肺叶切面呈大理石状。胸膜常有纤维素状附着物，胸腔及心包时有积液。4病原分离鉴定4.1材料4.1.1改良马丁氏琼脂。4.1.2 马丁氏肉汤。4.1.3糖发酵培养基。1 NY/T 564—-20024.1.41%蛋白陈水。4.1.5吲哚试验试剂（靛基质试验试剂）(Ehelich-Boehme 二氏试剂）。4.1.6氧化酶试验用试剂（1%盐酸四甲基对苯二胺溶液）。4.1.7运动性试验用培养基(半固体培养基)。4.1.8麦康凯琼脂培养基。以上各种培养基配制方法见附录A。4.2病原分离将濒死前或死后数小时内以无菌手术采病死猪的心血、肝脏组织，接种于改良马丁氏琼脂（见第A.4章)斜面，麦康凯琼脂（见第A.11章）平血，含10%绵羊全血的改良马丁琼脂平皿，含有0.1%裂解健康动物红细胞的全血、4%健康动物血清的改良马丁氏琼脂平血及马丁氏肉汤（见第A.5章）小管培养基，置 36℃～37℃培养。4.3病原鉴定4.3.1病原形态病原为多杀性巴氏杆菌，用肝脏组织或心血抹片可见革兰氏染色阴性，瑞氏染色呈两极浓染的球杆菌。4.3.2培养特性培养18 h～24h后，改良马丁琼脂斜面生长纯粹的培养物，呈微蓝色菌苔或菌落。马丁肉汤培养物生长为均匀混浊,不产生菌膜。麦康凯琼脂平皿上不生长。10%的血琼脂平皿上生长的菌落不出现溶血。在含有0.1%裂解血球全血、4%健康动物清的改良马丁氏琼脂平血上的单个菌落，肉眼观察光滑圆整，直径2mm～3mm，半透明，呈微蓝色。在低倍显微镜 45°折光下观察，应有虹彩，为蓝绿色荧光(Fg 菌落型），或桔红色荧光(Fo菌落型）。4.3.3生化特性4.3.3.1糖发酵试验：用1%蛋白陈水（见第A.7章），将改良马丁氏琼脂18h～24h的