SN_T 1961.5-2013出口食品过敏原成分检测 第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.5—2013出口食品过敏原成分检测第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分Detection of allergen components in food for export-Part 5: Realtime PCR method for detecting pistachio components2013-03-01发布2013-09-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.5-2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；一第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；一第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；-第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；一第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；-第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分;-第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；一第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；一第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；-第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；-第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第5部分。本部分按照GB/T 1.1一2009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、深圳大学。本部分主要起草人：陈颖、袁飞、顿玉慧、王海艳、吴亚君、曹际娟、杨海荣、徐宝梁、刘忠刚。1 SN/T 1961.5—2013出口食品过敏原成分检测第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分1范围SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原开心果成分的实时荧光·FCR法检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原开心果成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文伴3. 1过敏原allergen又称致敏原或变应原，能够引起变态反应的抗原。3. 2 pistachio开心果别名：阿月浑子、胡棒子、无名子，属漆树科(-Anacardiaceae)黄连木属（Pistacia）。开心果主要品种为中亚和地中海两大类群。3.3实时荧光 PCR real time PCR在PCR反应体系中加人荧光基团,利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3. 4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4方法提要样品经研磨后,提取 DNA,以 DNA为模板,采用开心果 18SrRNA与 5.8SrRNA 间区基因特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在过敏原开心果成分。 SN/T 1961.5—20135 试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1开心果成分扩增引物和探针、内参照(真核生物成分)引物和探针详见表1。表 试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC内参照探针C-TAMRA开心果5端引物GTGCCTCCACCCGTGCTT开心果18SrRNA与开心果3端引物AACGACGGGGCAATCGCAT5.8SrRNA基因间区开心果探针FAM-CAGAAGCATACGACCGACACCCGAC-TAMRA5.2 CTAB缓冲液:55 mmol/L CTAB,1 400 mmol/L NaCI,20 mmol/L EDTA,1