SN_T 3731.1-2013食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第1部分：鹌鹑成分检测 PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3731.1--2013食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法第1部分：鹑成分检测PCR 法Identification of poultry ingredient in food and feed--Part 1 : Detection of quail ingredient--PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布Dx国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T 3731.1—2013前言SN/T3731《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法》共分为以下6个部分第1部分：鹤鹑成分检测PCR法；第2部分：鹅成分检测PCR法；第3部分：鸽子成分检测　实时荧光PCR法；第4部分：火鸡成分检测　实时荧光PCR法；第5部分：鸭成分检测PCR法；第6部分：鹧鸪成分检测　实时荧光PCR法。本部分为SN/T3731的第1部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：宗卉、陈颖、阮周曦、张利平、韩建勋、曹琛福、张彩虹、杨俊兴、卢体康、花群义。1 SN/T 3731.1--2013食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法第 1部分：鹑成分检测　PCR 法 范围SN/T3731的本部分规定了食品及饲料中鹤鹑成分检测的PCR方法。本部分适用于食品及饲料中鹤鹑成芬的定性检测。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1多聚酶链式反应polymeran reaction;PCR-种体外扩增DNA 的方法。PCR使用一种耐热的多聚酶;以及两条含有20个左右碱基的单链引物。经过高温变性将模板DNA分离成两条链，低温退火使得引物和一条模板单链结合，然后是中温延伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5”端到3端合成一条互补的新链。而新合成的DNA又可以继续进行上述循环，因此DNA的数自不断倍增。3.2Taq DNA 酶 Thermus aquaticus DNA polymerase从 Thermus aquaticus 细菌中提取的耐热 DNA 聚合酶4缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate)CTAB：十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris:三(羟甲基)氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)DNA Marker:核酸相对分子质量标准5方法提要样品经研磨混匀后，提取 DNA，以DNA为模板,采用鹑线粒体 12 s RNA基因特异性检测引物1 SN/T 3731.1--2013进行PCR扩增，经电泳，在245bp大小处观察是否有扩增条带，必要时进行测序，来判断样品中是否存在鹤鹑成分。6试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合含GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物(对)序列鹑成分扩增引物详见表1。表 1试验用引物序列(5-3)目的基因名称F : 5′-TGAGCTCAATAGCCGCCA-3′鹤鹑成分5端引物鹤鹑线粒体12sRNA基因鹤鹑成分3端引物R: 5′-TGGCTTAATGGTTGGGTG-36.2 试剂6.2.1裂解液:1% CTAB;0.05 mol/L Tris-HCl(pH8.0);0.7 mol/L NaCI;0.01 mol/I. EDTA(pH8.0)。6.2.2DNA 聚合酶。6.2.310XPCR缓冲液。6.2.4硫酸镁。6.2.5dNTP 混合液。6.2.675%乙醇。6.2.7三氯甲烷。6.2.8异丙醇。6.2.9电泳缓冲液:Tris 54 g,硼酸 27.5 g,0.5 mol/I.EDTA·Tris-HCl(pH8.0)20 mL,加蒸馏水至1000 mL;使用时10倍稀释。6.2.10溴化乙锭（或等效染色剂）。6.2.11上样缓冲液。仪器和设备7.1离心机（最大离心力大于12000 g）。微量移液器(100 μL～1 000 μL,20 μI～200 μL,2 μL～20 μL,0.