NY 830-2004动物性食品中阿莫西林残留检测方法——HPLC.pdf

ICS 67.050X 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 830—2004动物性食品中阿莫西林残留检测方法-HPLCThe determination of amoxicillin in edible animal tissues-HPLC method2004-08-25 发布2004-09-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 830—2004前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心、北京师范大学分析测试中心。本标准主要起草人：单吉浩、谢孟峡、刘素英、杨清峰、薛毅、吴银良、王海。I NY/T 830—2004动物性食品中阿莫西林残留检测方法一高效液相色谱法(HPLC)1范围本标准规定了动物性食品中阿莫西林残留量检测的制样和高效液相色谱的测定方法。本标准适用于猪肌肉、猪皮、猪皮下脂肪和鸡肌肉中阿莫西林的残留量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版文本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规则和实验方法3 制样3.1样品的制备取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎并使之均勾。3.2样品的保存～20℃以下冰箱中贮存备用。4　测定方法4.1方法提要或原理匀浆后的试样经过磷酸提取液提取和三氯乙酸沉淀蛋白，过C18固相萃取柱净化，用含适的溶剂选择洗脱,经过衍生化，供高效液相色谱定量(紫外检测器)测定。外标法定量。4.2试剂和材料以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合 GB/T6682 规定的二级水。4.2.1阿莫西林含阿莫西林(C16HrgN3OsS）不得少于98.9%。4.2.2三氯乙酸4.2.31,2,4-三唑4.2.4氯化汞4.2.5乙腈：色谱纯4.2.6甲醇：色谱纯4.2.7磷酸二氢钠4.2.8磷酸氢二钠4.2.9硫代硫酸钠4.2.10氢氧化钠4.2.11乙酸酐1 NY/T 830—20044.2.12氢氧化钠溶液5.0mol/L取氢氧化钠饱和溶液14mL,加水稀释至100mL。4.2.13磷酸缓冲液0.05mol/L取磷酸氢二钠6.28g,磷酸二氢钠5.11g,硫代硫酸钠3.11g,加水使溶解,并稀释至1000mL。使用前,过0.45 μm 滤膜。4.2.14氯化汞溶液0.026mol/L取氯化汞0.072g,加水使溶解,并稀释至10mL。4.2.15乙酸酐溶液0.20mol/L取乙酸酐0.1mL,加乙腈稀释至5mL。4.2.16衍生化试剂取1,2,4-三唑1.37g加6mL水使溶解,加1mL0.026mol/L氯化汞溶液,用5.0mol/L氢氧化钠溶液调 pH至 9.0,加水稀释至 10 mL。随配随用。4.2.17磷酸氢二钠溶液0.025 mo1/L取磷酸氢二钠0.22g,加水使溶解，用5.0mol/L氢氧化钠溶液调pH至9.0,加水稀释至50mL。4.2.18提取液取磷酸二氢钠1.68g,加水使溶解,用磷酸调pH至4.5,加水稀释至500mL。4.2.19三氯乙酸溶液75%(w/v）取三氯乙酸7.5g,加水使溶解并稀释至10mL。4.2.20三氯乙酸溶液2%（w/v）取三氯乙酸2.0g,加水使溶解并稀释至100mL。4.2.21阿莫西林标准储备液准确称取阿莫西林对照品25mg,加水使溶解并稀释至浓度约为1.0mg/mL的储备液,置于2℃～8℃冰箱中保存,有效期1个月。4.2.22阿莫西林标准工作液准确量取适量阿莫西林标准储备液,用水稀释成适宜浓度的阿莫西林标准工作液。4.3仪器和设备4.3.1高效液相色谱仪(配紫外检测器)4.3.2分析天平感量 0.0001g4.3.3天平感量0.01g。4.3.4涡旋震荡混合器4.3.5组织匀浆机4.3.650mL离心管4.3.7固相萃取装置4.3.8离心机4.3.9固相萃取柱C8100 mg/ml,含碳量≥16%。4.3.10氮气吹干装置4.3.11恒温水浴锅4.3.12滤膜2 NY/T 830—20040.45 μm，水相。4.4测定步骤4.4.1试料的制备试料的制备包括：-取绞碎后的供试样品，作为供试材料。-取绞碎后的空白样品，作为空白材料。-取绞碎后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。4.4.2提取称取(5±0.05）g试料，置于30mL匀浆杯中,加10ml提取液，10000r/min匀浆1min,匀浆液转人50mL离心管中,振荡混合5min,4000r/min离心10min，上清液转人另一25mL离心管中。用提取液5mL洗刀