SN 1086-2002胎儿弯杆菌的分离鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1086—2002胎儿弯杆菌的分离鉴定方法Procedure of isolation and identification for campylobactor fetus2002-03~15发布2002-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1086—2002前言本标准是按照GB/T1.1一1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》的要求编写的。本标准依据国际动物流行病管理局(OIE)标准手册，在加拿大国家动物疾病研究所实验室操作规程的基础上，根据国内实验室条件，在不影响检验结果的条件下，对上述规程进行了部分修改而制定的。本标准的附录 A 是标准的附录,附录 B是提示的附录。本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：秦贞奎、侯艳梅、张碧波、张立怀。本标推系首次发布的检验检疫行业标准。 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T儿弯杆菌的分离鉴定方法Procedure of isolation and identification for campylobactor fetus1 范围本标准规定了胎儿弯杆菌的分离鉴定方法。本标准适用于牛、绵羊、冷冻精液、流产胎儿、胎衣等的胎儿弯杆菌的检验。其他动物可参照使用。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准必威体育精装版版本的可能性。GB 4789.28一1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T6682--1992分析实验室用水规格和试验方法3设备和材料3.1混合气体（质量比为3.5%氧气、10%二氧化碳、86.5%氮气）。3.2厌氧培养罐。3.3采样棒及吸球。3.42mL注射器、5号针头、20号针头。3.510mL灭菌瓶及生理盐水。3.6供常规细菌分离监定用的基本设备与材料。4 培养基和试剂4.1增菌运输培养基(TEM)：配制方法见附录A之A1。4.2半胱氨酸牛心浸膏培养基(CH)：配制方法见附录A之A2。4.3 Mueller Hinton Agar(MH):配制方法见附录 A 之 A3。4.4巯基乙酸盐肉汤(Thiogly Collate Broth)：配制方法见附录A之A4。4.5各种相应生化培养基（配制方法见GB4789.28)。5 样品采集与处理5.1母牛站立或六柱栏保定，用5%来苏儿消毒牛的外阴部，将无菌采样一端的吸球压扁，将采样端插人阴道中并来回抽动，吸取阴道粘液。取出采样棒后，插入盛有3mL灭菌生理盐水的小瓶中吹吸数次，即为冲洗液。冲洗液静置 1 min～2 min，用灭菌注射器吸取上清液 2 mL，分别注人两瓶增菌运输培养基中，每瓶1 mL。振荡混匀。尽快送至实验室。接种样品的TEM培养基运输途中应保存在18℃且不超过 48 h。5.2公牛六柱栏保定，用绳子固定采样侧的后肢，剪短阴简外部的阴毛，用5%的来苏儿消毒公牛的尿道口，将无菌采样棒的采样端插人阴简内，将另一端的吸球压扁并来回抽动，吸取包皮粘液。取出采样棒2002-09-01 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-03-15批准1 SN/T 1086—2002迅速插入盛有 3 mL灭菌生理盐水的无菌瓶中吹吸数次，即为冲洗液。冲洗液静置 1 min～2 min，用灭菌注射器吸取上清液2mL，分别注人两瓶增菌运输培养基中，每瓶1mL。振荡混匀。尽快送至实验室。接种样品的TEM培养基运输途中应保存在18C且不超过48h。5.3冷冻精液：精液尽可能在无菌条件下采取，将精液装人无菌瓶中，密封后送往实验室。5.4流产胎儿、胎衣：流产胎儿胃内容物用棉拭子直接接种到含抗菌素的MH或CH琼脂平板上；胎衣、流产胎儿的肺、肝，表面火焰消毒后用生理盐水匀浆，制成勾浆液。6分离培养6.1取样品做革兰氏染色并做湿涂片镜检。6.2可用棉拭子蘸取冲洗液或匀浆液直接涂布于含抗菌素的MH或CH 琼脂平板上。6.3已接种样品的增菌运输培养基置37℃培养72h。用直径3mm的接种环将增菌液分别划线于两个 MH 或 CH 平板培养基上。6.4将所有 MH 或 CH 平板放置厌氧培养罐中，密闭后将罐内空气抽出，达到一5.5kPa 时停止，充人经0.22μm滤膜过滤的混合气体至气压为零，再将气体抽出和充人反复两次。将培养罐置37C培养72 h.6.5观察MH、CH培养基上有无疑为胎儿弯杆菌的菌落，如无可弃之。将典型或可疑菌落划线于MH或 CH琼脂平板培养基上培养 72 h。胎儿弯杆菌在MH或