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高效液相色谱 第一页，共二十一页，2022年，8月28日 第三章高效液相色谱分析法 一、高效液相色谱仪 HPLC 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三、流程及主要部件 general process and main assembly of HPLC 第一节高效液相色谱的特点与仪器 high performance liquid chromatograph feature and instrument of HPLC 第二页，共二十一页，2022年，8月28日 一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 第三页，共二十一页，2022年，8月28日 液相色谱仪（2） 第四页，共二十一页，2022年，8月28日 液相色谱仪（3） 第五页，共二十一页，2022年，8月28日 液相色谱仪（4） 第六页，共二十一页，2022年，8月28日 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 第七页，共二十一页，2022年，8月28日 三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 1.流程 第八页，共二十一页，2022年，8月28日 2.主要部件 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 第九页，共二十一页，2022年，8月28日 (2)梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 第十页，共二十一页，2022年，8月28日 (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： 第十一页，共二十一页，2022年，8月28日 (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 第十二页，共二十一页，2022年，8月28日 (5) 液相色谱检测器 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 第十三页，共二十一页，2022年，8月28日 b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 第十四页，共二十一页，2022年，8月28日 第十五页，共二十一页，2022年，8月28日