SN_T 4180-2015线虫传多面体病毒属病毒RT-PCR筛查方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4180—2015线虫传多面体病毒属病毒RT-PCR筛查方法Screening protocols for Nepovirus by universal RT-PCR2015-09-01实施2015-02-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局查真伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准线虫传多面体病毒属病毒RT-PCR 筛查方法SN/T 4180—2015*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 0.75字数 18 千字2016年4月第一版2016年4月第一次印刷印数 11 100*书号：155066·2-29428 SN/T 4180-2015前言本标准按照GB/T1.1-2009 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、云南省烟草农业科学研究院、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林石明、廖富荣、方敦煌、吴媛、方志鹏、陈青、陈红运、黄蓬英、邓丛良。r SN/T 4180—2015引言本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及本标准第6.2条与ZL201110087903.4《一种豇豆花叶病毒亚科病毒通用RT-PCR检测用简并引物、检测方法及其应用》相关的专利的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构保证，其愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可通过以下联系方式获得：专利发明人：廖富荣、黄蓬英、林石明专利权人：厦门出人境检验检疫局检验检疫技术中心地址：福建省　厦门市　海沧区　建港路　2165号邮编：361026联系电话：0592-3269916邮箱地址：lfr005@163.com请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。I SN/T 4180—2015线虫传多面体病毒属病毒RT-PCR 筛查方法1范围本标准规定了线虫传多面体病毒属病毒的通用RT-PCR检测鉴定方法。本标准适用于寄主植物中线虫传多面体病毒的筛查检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3线虫传多面体病毒属基本信息中文名称：线虫传多面体病毒属学名:genus Nepovirus属于小RNA病毒目（Picornavirales），伴生紅豆病毒科（Secoviridae），豇豆花叶病毒亚科（Comovirinae）。该病毒属包括南芥菜花叶病毒（Arabis mosaic virus，ArMV）、桃丛簇花叶病毒（Peachrosette mosaic virus,PRMV）、烟草环斑病毒（Tobacco ringspot virus，TRSV）、番茄黑环病毒（Tomatoblack ring virus，TBRV）、番茄环斑病毒（Tomato ringspot virus，ToRSV）等重要的检疫性植物病毒。有关该病毒属的其他信息参见附录 A。4方法原理以线虫传多面体病毒属病毒的基因组序列中的保守区域设计合成简并引物，建立该病毒属的通用RT-PCR检测方法；并对PCR 产物进行序列测定，通过序列分析对病毒种类进行快速鉴定。因此，线虫传多面体病毒属的分子生物学特征是制定本检测鉴定方法的主要依据。5仪器设备与试剂5.1主要仪器设备与用具主要使用以下仪器设备：研磨仪、微量天平（感量：0.001g）、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像仪、高速冷冻台式离心机、水浴槽或恒温孵育器、pH计、各种量程的可调移液器（1000 μL、200 uL、100 μL、20 μL、10 μL、2 μL)等。5.2主要试剂主要试剂见附录 B。1 SN/T 4180-20156检测和鉴定6.1抽样检查按照SN/T 2122给出的方法进行抽样、取样。6.2通用 RT-PCR 检测方法按附录B给出的方法，进行通用RT-PCR检测。用已知病毒分离物作阳性对照，健康植物组织作阴性对照，并设置空白对照。6.3序列测定和分析将PCR产物回收后，进行克隆、测序，或者PCR产物直接测序（序列测定可由专业的生物公司完成）。把测定的核苷酸序列及翻译后的氨基酸序列与已知线虫传多面体病毒属的病毒序列进行比对。注：