SN_T 4853.2-2017转基因大米定量检测 数字PCR法 第2部分：克螟稻品系.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4853.2-2017转基因大米定量检测数字 PCR 法第2部分：克螺稻品系Quantitative detection of genetically modified rice-Digital PCR-Part 2:Event KMD2017-07-21 发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局0n9x315.子余层套真伪 SN/T 4853.2—2017前 言SN/T4853《转基因大米定量检测数字PCR法》系列标准共分为7部分：第1部分：TT51-1品系；第2部分：克稻品系；第3部分：科丰6号品系；第4部分：M12品系；第5部分：LL62品系；-第6部分：T2A-1品系；-第7部分：T1C-19品系。本部分为SN/T4853标准的第2部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、黄文胜、邓婷婷、付伟、韩建勋、李想、朱水芳、吴亚君、聂丹丹。人 SN/T 4853.2--2017转基因大米定量检测数字PCR法第2 部分：克螺稻品系1范围SN/T4853的本部分规定了稻谷和大米中克稻品系的数字PCR定量检测方法。本部分适用于稻谷和大米中克稻品系特异性的数字PCR定量检测。本方法的定量检测低限（1OQ）为0.1%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T19495.5转基因产品检测核酸定量 PCR检测方法GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法3术语和定义、缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1SPS 基因 The gene of sucrose phosphate synthase蔗糖磷酸合成酶基因,大米单拷贝内参照基因。3.1.2克螺稻转化体特异性序列event-specific sequence of KMD外源DNA插入受体大米基因组后经重组产生的邻接区序列。具体序列参见附录A。3.1.3Taq 酶 Taq DNA polymerase源于水生栖热菌的耐热DNA聚合酶。3.1.4模板template数字PCR引物/探针扩增检测的特定DNA片段。3.1.5定量检测低限limit of quantification;LOQ在相对标准差不超过25%的条件下，检测方法所能定量的最低转基因成分百分含量。1 SN/T 4853.2—20173.1.6质控样品quality control sample具有确定的 SPS基因和转化体特异性序列拷贝数的基因组DNA。3.1.7微反应体系tiny reaction system将含有模板、引物/荧光探针、耐热DNA复制酶及其缓冲液充分混匀之后分配至体积相同且相互物理隔离的油包水液滴或其他微孔、微室中所形成的小体积荧光PCR反应体系。3.1.8转换系数Conversion factor将转化体特异性序列和内参照基因拷贝数之比转换为转基因成分含量(W/W)时所用系数。3.1.9荧光标记探针Fluorescently tagged probe在5末端和3末端分别连接荧光报告基团和淬灭基团的寡核苷酸。PCR扩增时，Taq酶的5-3外切酶活性将探针水解，使报告基团和淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。数字 PCR：数字聚合酶链式反应（digital polymerase chain reaction)DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核甘酸二磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)bp:碱基对(base pair)NC:阴性对照(negaitive control)NTC:空白对照(no template control)PC:阳性对照(positive control)4防污染措施数字PCR定量检测过程的防污染措施应符合GB/T19495.2的规定。５原理数字PCR（digitalPCR）是在荧光PCR基础上发展起来