SN_T 3953-2014国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、星状病毒的多重RT-PCR检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3953—2014国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、星状病毒的多重RT-PCR检测方法Detection of rotavirus(group A) , norovirus and astrovirusby multiple RT-PCR at frontier port2014-11-01实施2014-04-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3953—2014前言本标准按照 GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、深圳市计量质量检测研究院、中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：莫秋华、谭华、李卫岗、梁玉英、胡科新、罗忠鑫、史咏梅、杨泽、涂承宁、祝琰，I SN/T 3953—2014国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、星状病毒的多重RT-PCR检测方法1范围本标准规定了国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、星状病毒多重 RT-PCR 检测的对象、检测方法及结果报告。本标准适用于国境口岸轮状病毒（A组）诺如病毒,星状病毒的实验室检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489　实验室　生物安全通用要求SN/T 1193基因检验实验室技术要求SN/T 1720出人境口岸轮状病毒感染监测规程临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用WS/T 23013术语和定义下列术语和定义适用于本3.1轮状病毒rotavirus属于呼肠孤病毒科(Reoviidae)轮状病毒属(Rotaviru为双链 RNA 病毒，基因组分 11个节段，是引起人类、哺乳动物类和鸟类腹泻的主要病原体。轮状病毒有 7个血清组(A～G),其中 A、B、C组能引起人和动物腹泻，以A组最常见它是耍幼儿腹泻首要的致病原。3.2诺如病毒‧Norovirus诺瓦克样病毒Norwalk-like viruses; NLV诺沃克样病毒Norwalk-like viruses; NLV属于杯状病毒科（Caliciviridae)诺如病毒属（Norovirus），为单股正链RNA病毒，是引起成人和婴幼儿急性非细菌性胃肠炎的重要病原体，全世界范围内均有流行，全年均可发生感染。诺如病毒原称为诺瓦克样病毒或诺沃克样病毒（Norwalk-like viruses，NLV），诺瓦克病毒（Norwalk virus，NV）是这组病毒的代表种,2002 年第8届国际病毒分类委员会将其正式命名为 Norovirus，我国按照音译称为诺如病毒。3.3星状病毒Astrovirus属于星状病毒科（Astroviridae)哺乳类星状病毒属（Mamastrovirus），为单股正链RNA病毒，是弓起婴幼儿腹泻的重要病原体。1 SN/T 3953—20143.4逆转录聚合酶链反应reverse transcription polymerase chain reaction;RT-PCR将RNA的逆转录(RT)和 cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。本标准采用-步法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。在--步法 RT-PCR 中，首先以 RNA 为模板,利用下游特异性引物，在依赖 RNA 的 DNA 聚合酶(逆转录酶)的作用下转录合成互补 DNA（cDNA）,该步称作“逆转录”;随后,再以 cDNA 为模板，利用上游和下游特异性引物,在 DNA 聚合酶的作用下进行 PCR循环扩增;最终使RNA分子的某个特定区域(目的片段)被扩增达几百万倍。3.5相同标签辅助-无引物二聚体homo-tag assisted non-dimer;HAND采用同源加尾的方式，即在上游引物和下游引物的5末端分别加上相同的标签序列，利用标签序列作为通用引物扩增由特异性引物产生的PCR片段，从而能有效地抑制引物二聚体的产生，减小多重PCR体系中各基因间扩增效率的差异，提高多重 PCR的稳定性、均一性和扩增效率。HAND系统又可译为同源加尾系统。4缩略语下列缩略语适用于本文件。4.1DEPC:diethyl pyrocarbonate，焦碳酸乙二酯4.2PAGE:polyacrylamide gel electrophoresis,聚丙烯酰胺凝胶电泳。4.3 bp:base pair,碱基对。5 检测对象5.1国境口岸发现的有呕吐、腹泻和发热等症状，疑似腹泻病毒感染的急性肠胃炎病人。5.2其他申请检验的人员。6生物安全和PCR防污染要求实验室生物安全应符合GB19489的规定。PCR防污染措施按WS/T