SNT 1775-2006进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中链霉素残留量检测方法 液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1775-2006进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中链霉素残留量检测方法液相色谱法Determination of streptomycin residues in royal jelly and royal jellypowder for import and export-Liquid chromatographic method2006-04-25发布2006-11-15 实施中华人民共和国发布功素层缓 11 查动国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1775—2006前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈笑梅、池浩超、陈晓霞、王栋、施旭霞、刘海山、石磊。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I SN/T 1775--2006进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中链霉素残留量检测方法液相色谱法1范围本标准规定了进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中链霉素残留量检测的制样和液相色谱测定方法。本标准适用于进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中链霉素残留量的检测。2制样2.1试样的制备将抽取的样品充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内，一份作为留样保存，另一份作为试样供检测用。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生含量的变化。2.2试样的保存试样宜及时检测,在不能及时检测的情况下,应置于一18℃以下冷冻保存。3测定方法·3.1方法提要试样中的链霉素用稀磷酸提取，三氯乙酸沉淀样品中的蛋白质，清液过阳离子交换柱和HLB固相萃取小柱净化。液相色谱柱后衍生荧光检测器测定样品中的链霉素，外标法定量。3.2试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸水或去离子水。3.2.1甲醇：液相色谱级试剂。3.2.22乙腈：液相色谱级试剂。3.2. 3磷酸:≥85%。3.2.4乙酸。3.2.5石磷酸氢二钾。3.2.6矿磷酸二氢钾。3.2.7氢氧化钠。3.2.8三氯乙酸。3.2.9庚烷磺酸钠(C,H1sNaO,S.H2O):液相色谱纯。3. 2. 101,2-萘醌-4-磺酸钠。3.2.1130%甲醇水溶液：甲醇+水(30+70,V/V)。3.2.12稀磷酸溶液:pH=2。1000 mL水中滴加磷酸,在 pH计上调节溶液的 pH为 2。3.2.13磷酸盐缓冲溶液:0.2mol/L，pH=8。称取33.46g磷酸氢二钾和1.05g磷酸二氢钾于烧杯中,加水溶解后定容至 1 000 mL。用磷酸调节溶液 pH 为8。3.2.14氢氧化钠溶液：0.2mol/L，称取8g氢氧化钠溶于适量水，再定容至1000ml。3.2.15三氯乙酸溶液：50%水溶液。称取100g三氯乙酸溶于适量水，再定容至100mL。3.2.16饱和氢氧化钠溶液。3.2.17庚烷磺酸钠溶液：0.5mol/L，称取11g庚烷磺酸钠溶于100mL水中。3.2.18庚烷磺酸钠酸溶液：0.01mol/L,pH3.3。称取2.2g庚烷磺酸钠溶于900mL水中，滴加乙1 SN/T 1775--2006酸，在 pH计上调节溶液的pH为 3.3。加水定容至1000 mL。3.2.19阳离子交换柱：苯磺酸型固相萃取柱,500mg，3mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预洗并保持柱体湿润。3.2.20HLB固相萃取柱:500 mg，3mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预洗并保持柱体湿润。3.2.21链霉素标准品：95.8%。3.2.22链霉素标准储备液：精确称取适量链霉素标准品，用水溶解，配制成100μg/mL。4℃储存。3.2.23链霉素工作溶液：根据需要，将储备液用0.01mol/L庚烷磺酸钠酸溶液稀释至适当浓度的工作溶液。:3.3仪器和设备3.3.1高效液相色谱仪：配有柱后衍生装置和荧光检测器。3.3.22 离心机(4 000 r/min)。3.3.3混匀器。3.3.4真空固相萃取装置。3.3.5pH计：精确至0.02。3.3.6其盖塑料离心管：100mL3.4测定步骤3.4.1提取称取蜂王浆10g(精确至0.01g），置于50mL容量瓶中，加40mL稀磷酸溶液在混匀器上混匀，再加人50%三氯乙酸2mL，用稀磷酸定容,轻轻混勾，将溶液转移到离心管中，离心（4000r/min)5min，过滤。取滤液25mL用饱和氢氧化钠溶液调节pH为2.0,待净化用。称取蜂王浆冻干粉5g(精确至0.01g)置于离心管中，加人58mL稀磷酸溶液在混匀器上混匀，再加人50%三氯乙酸2mL，轻轻混匀，离心（4000r/min)5min，过滤。取滤液30mL用饱和氢氧化钠溶液调节 pH为2.0,待净化用。3.4.2阳离子交换柱净化将上述滤液过预先淋洗好的苯磺酸型固相萃取柱